試劑盒組分：

Catalog#

PD1211-01

Preps

50

ezBind Columns

50

Buffer A1

15 mL

Buffer B1

15 mL

Buffer N1

20 mL

Buffer KB

30 mL

DNA Wash Buffer*

15 mL

Elution Buffer

10 mL

RNase A （20 mg/mL）

1.5 mg（75 µL）

User Manual

1

保存條件：

RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。

注意事項(xiàng)：

使用前請將適量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇終濃度為80%

純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同體積的Wash Buffer和Elution Buffer

若為-70^oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。

操作簡要步驟：

接種新鮮的單個(gè)菌落到1-4 mL的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37^oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下10,000 x g離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。

加入250 µL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液槍或渦流震蕩充分懸浮細(xì)菌細(xì)胞。

加入 250 µL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。

加入350 µL Buffer N1, 立即反轉(zhuǎn)多次，至溶液充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。

室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心）。

小心吸取離心后的上清液至帶有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室溫下13,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。

可選: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。

向離心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer（確保已加入無水乙醇），室溫下，13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“8”。

將離心柱放回高速離心機(jī)中，13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘，以*去除殘留的乙醇。

將離心柱轉(zhuǎn)至一個(gè)新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入50~100 µL（體積>50 µL）的ddH₂O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置2分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質(zhì)粒DNA。將洗脫液再加入到柱中，在13,000 rpm 離心1分鐘，收集洗脫液。

操作流程：

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質(zhì)粒小抽詳細(xì)參數(shù)

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提示

Catalog#	PD1211-01
Preps	50
ezBind Columns	50
Buffer A1	15 mL
Buffer B1	15 mL
Buffer N1	20 mL
Buffer KB	30 mL
DNA Wash Buffer*	15 mL
Elution Buffer	10 mL
RNase A （20 mg/mL）	1.5 mg（75 µL）
User Manual	1