通用名稱(chēng)：核酸分離試劑盒（硅膠膜吸附法）
英文名稱(chēng)：Nucleic Acid Isolation Kit
 

1. 樣本預(yù)處理
血清及血漿樣本按常規(guī)方法制備，新鮮樣本應(yīng)盡快處理或分裝后于-70℃凍存，避免反復(fù)凍融。
2. 準(zhǔn)備及注意事項(xiàng)：
2.1 分別在洗液A瓶和洗液B瓶中加入16ml和60ml無(wú)水乙醇，顛倒充分混勻，并在瓶身上加以標(biāo)識(shí)。
2.2 吸取所需的洗脫液，加至一無(wú)核酸酶的eppendorf管中，于70℃預(yù)熱。
2.3 冷凍樣本應(yīng)室溫融化，輕微震蕩混勻后使用。
2.4 區(qū)分操作中的離心設(shè)置（rpm和g），本產(chǎn)品操作過(guò)程均為室溫離心。
2.5 助沉劑在低溫保存時(shí)可能呈膠狀，吹打混勻即可使用。
3. 樣本裂解及核酸吸附
3.1 在1.5ml無(wú)核酸酶的離心管中加入5μl助沉劑和200μl 裂解液，加入100μl待處理樣本，劇烈震蕩2分鐘，室溫靜置10分鐘。
注：如樣本體積小于或大于100ul，需按比例改變助沉劑、裂解液以及無(wú)水乙醇體積。體積大于400ul樣本應(yīng)分多次進(jìn)行處理。
3.2 加入240μl無(wú)水乙醇，顛倒混勻，將裂解混合物全部轉(zhuǎn)移到核酸吸附柱中。
注：如樣本體積小于或大于100ul，需按比例改變乙醇用量。裂解混合物分兩次全部轉(zhuǎn)移至核酸吸附柱中。
3.3 3500g離心2分鐘，取下套管，倒掉套管中的液體。
3.4 將核酸吸附柱重新裝入套管，6000g離心1分鐘，倒掉套管中的液體。
4. 核酸純化
4.1 將核酸吸附柱重新裝入套管，在核酸吸附柱中加入500μl 洗液A，6000g離心1分鐘，將核酸吸附柱裝入一個(gè)干凈套管中。
4.2 在核酸吸附柱中加入500μl 洗液B，靜置1分鐘，6000g離心1分鐘。
4.3 倒掉套管中的液體，將核酸吸附柱重新裝入套管。
4.4 重復(fù)4.2步驟。
4.5 將核酸吸附柱換一新套管，13000rpm離心3分鐘。
5. 核酸洗脫
5.1 將核酸吸附柱裝入一無(wú)核酸酶1.5ml離心管，小心在吸附膜中央加入50μl預(yù)熱洗脫液，室溫靜置4分鐘。
5.2 10000rpm離心2分鐘，離心管中液體即待檢純化RNA。
6. 使用真空泵進(jìn)行核酸分離
本試劑盒可使用真空泵進(jìn)行操作，真空泵主要用于替換步驟3 -5 中的離心過(guò)程。具體方法為：將柱子插到真空架的接口，開(kāi)啟離心泵抽真空，柱子內(nèi)的液體全部抽干時(shí)關(guān)掉電源。
其中后一步離心洗脫時(shí)仍使用5.2 中離心步驟制備。
 

使用經(jīng)梯度稀釋的人工假病毒作為質(zhì)控品（L1~L4），用進(jìn)口同類(lèi)試劑（如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini Kit）對(duì)質(zhì)控品進(jìn)行核酸分離，并用熒光PCR方法檢測(cè)核酸含量。使用本品進(jìn)行核酸分離低應(yīng)達(dá)到同等檢測(cè)結(jié)果（質(zhì)控品陽(yáng)性率2/4）。

【包裝規(guī)格】48次/包裝。
【儲(chǔ)存條件及有效期】核酸分離試劑于2-8℃保存，有效期12個(gè)月。