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詳細介紹
通用名稱：腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16型雙通道病毒RNA檢測試劑盒（熒光PCR法）說明書
英文名稱：Diagnostic Kit for Human Enterovirus 71（HEV71）and Coxsackievirus A 16 virus（CoxA16）Viral Nucleic Acid（Fluorescence PCR）
英文名稱：Diagnostic Kit for Human Enterovirus 71（HEV71）and Coxsackievirus A 16 virus（CoxA16）Viral Nucleic Acid（Fluorescence PCR）
產(chǎn)品特點:
本試劑用于對咽試子、肛試子樣本中腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16型RNA進行定性檢測，用于腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16型感染的輔助診斷及流行病學監(jiān)控。
【檢驗原理】根據(jù)熒光PCR技術原理，針對腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16型基因設計特異性引物和Taqman探針，通過熒光PCR檢測儀進行檢測，從而實現(xiàn)對腸道病毒病毒RNA的定性檢測。
該系列的熒光PCR法檢測試劑盒內(nèi)包含滿足48人份檢測所需要的試劑，同常規(guī)RT-PCR檢測方法相比，該檢測試劑盒具有以下的優(yōu)點：
1、無需電泳分析PCR終末產(chǎn)物；
2、在PCR擴增過程中實時檢測核酸的擴增；
3、具有快速、簡便、敏感和特異的優(yōu)點；
4、可以防止因打開PCR產(chǎn)物污染樣品的風險。
試驗方法：
1. 核酸分離：
取200μl咽試子（肛試子）樣本進行核酸提取。采用北京金豪制藥股份有限公司的核酸分離試劑盒 （硅膠膜吸附法），該試劑盒可用于對腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16型樣本中的病毒RNA提取，并按試劑盒說明書要求操作。
本品中的陰性、陽性對照參與核酸提取。
2. PCR擴增：
2.1 實驗設計：
2.1.1待檢樣本檢測：每份樣本使用腸道病毒反應液進行檢測，根據(jù)腸道病毒反應液的檢測結果對樣本進行判定。
2.1.2對照品檢測：每次試驗都應設置陰性對照和陽性對照。
2.2反應體系的配制：
2.2.1準備工作：將腸道病毒反應液融化后振蕩混勻，離心6000rpm 10秒。
2.2.2 反應體系配制：取1個1.5ml 無核酸酶離心管，計算待測樣本數(shù)量（n），取20μl×（n+2）腸道病毒反應液、1μl×（n+2）DNA聚合酶和0.35μl×（n+2）逆轉錄酶充分混勻，離心6000rpm 10秒。
n+2=n份樣本+1份陽性對照+1份陰性對照;
2.3反應體系分管：
每份待測樣本設置1個PCR擴增管，分別將每種反應體系按20μl/管分裝至對應的PCR擴增管中。
2.4加樣：
取5μl（待測樣本RNA、陰性對照、陽性對照）分別加入1個PCR擴增管。
2.5擴增檢測：
將加樣后的PCR擴增管分別轉移到全自動熒光定量PCR檢測儀上進行擴增檢測，不同儀器的設置詳見說明書...
取200μl咽試子（肛試子）樣本進行核酸提取。采用北京金豪制藥股份有限公司的核酸分離試劑盒 （硅膠膜吸附法），該試劑盒可用于對腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16型樣本中的病毒RNA提取，并按試劑盒說明書要求操作。
本品中的陰性、陽性對照參與核酸提取。
2. PCR擴增：
2.1 實驗設計：
2.1.1待檢樣本檢測：每份樣本使用腸道病毒反應液進行檢測，根據(jù)腸道病毒反應液的檢測結果對樣本進行判定。
2.1.2對照品檢測：每次試驗都應設置陰性對照和陽性對照。
2.2反應體系的配制：
2.2.1準備工作：將腸道病毒反應液融化后振蕩混勻，離心6000rpm 10秒。
2.2.2 反應體系配制：取1個1.5ml 無核酸酶離心管，計算待測樣本數(shù)量（n），取20μl×（n+2）腸道病毒反應液、1μl×（n+2）DNA聚合酶和0.35μl×（n+2）逆轉錄酶充分混勻，離心6000rpm 10秒。
n+2=n份樣本+1份陽性對照+1份陰性對照;
2.3反應體系分管：
每份待測樣本設置1個PCR擴增管，分別將每種反應體系按20μl/管分裝至對應的PCR擴增管中。
2.4加樣：
取5μl（待測樣本RNA、陰性對照、陽性對照）分別加入1個PCR擴增管。
2.5擴增檢測：
將加樣后的PCR擴增管分別轉移到全自動熒光定量PCR檢測儀上進行擴增檢測，不同儀器的設置詳見說明書...
結果的解釋、產(chǎn)品性能指標:
每次試驗應設置陽性對照和陰性對照，且應符合以下要求，否則試驗結果不成立。
4.1陰性對照無Ct值或Ct值為0。
4.2 陽性對照Ct值小于30.0。
【參考值（參考范圍）】
Ct值≤37.0報告該反應陽性；無Ct值或Ct值為0報告該反應陰性；
37.0＜Ct值＜40.0為灰區(qū)。
【檢驗結果的解釋】
結果在灰區(qū)的樣本需重復試驗：取400μl樣本重新提取RNA（核酸分離試劑盒中裂解液、助沉劑、無水乙醇的用量加倍，其他組分的用量不變）并檢測。復檢結果Ct＜40.0的樣本為陽性，否則為陰性。
【檢驗方法的局限性】
本試劑盒檢測的靶序列分別為腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16型基因，該靶基因在各毒株間都是高度保守且很穩(wěn)定。但如果在靶序列處發(fā)生基因突變，則有可能造成假陰性結果，即發(fā)生漏檢。
4.1陰性對照無Ct值或Ct值為0。
4.2 陽性對照Ct值小于30.0。
【參考值（參考范圍）】
Ct值≤37.0報告該反應陽性；無Ct值或Ct值為0報告該反應陰性；
37.0＜Ct值＜40.0為灰區(qū)。
【檢驗結果的解釋】
結果在灰區(qū)的樣本需重復試驗：取400μl樣本重新提取RNA（核酸分離試劑盒中裂解液、助沉劑、無水乙醇的用量加倍，其他組分的用量不變）并檢測。復檢結果Ct＜40.0的樣本為陽性，否則為陰性。
【檢驗方法的局限性】
本試劑盒檢測的靶序列分別為腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16型基因，該靶基因在各毒株間都是高度保守且很穩(wěn)定。但如果在靶序列處發(fā)生基因突變，則有可能造成假陰性結果，即發(fā)生漏檢。
規(guī)格、有效期:
【包裝規(guī)格】48人份/盒
【儲存條件及有效期】-20℃冷凍保存，有效期暫定6個月，陽性對照反復凍融次數(shù)不得超過5次。
【適用儀器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自動熒光PCR檢測儀。
【樣本要求】1. 樣本類型：咽試子、肛試子。
【儲存條件及有效期】-20℃冷凍保存，有效期暫定6個月，陽性對照反復凍融次數(shù)不得超過5次。
【適用儀器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自動熒光PCR檢測儀。
【樣本要求】1. 樣本類型：咽試子、肛試子。
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