目的日常生活中，大面積深度燒傷、糖尿病、創(chuàng)傷等因素常造成正常皮膚結(jié)構(gòu)完整性及生理功能的破壞。如何有效的修復(fù)創(chuàng)面、重建皮膚正常組織結(jié)構(gòu)恢復(fù)皮膚正常生理功能，成為目前實驗研究以及臨床治療的難點。皮膚損傷的修復(fù)是一個非常復(fù)雜的過程，由多種生長因子及細(xì)胞因子介導(dǎo)，其中角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)發(fā)揮了重要的作用。角質(zhì)細(xì)胞生長因子為成纖維細(xì)胞生長因子家族的一員，它通過與受體(KGFR)結(jié)合發(fā)揮作用，是一種促上皮細(xì)胞增殖的生長因子，與創(chuàng)面愈合息息相關(guān)，還與免疫重建、器官發(fā)育、腫瘤發(fā)生等多方面關(guān)系密切。該因子由間質(zhì)細(xì)胞分泌，其表達受IL-1、血小板衍生生長因子BB、轉(zhuǎn)化生長因子、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子的正調(diào)控作用影響，通過間充質(zhì)一上皮相互作用方式，對多種組織器官，包括肺、皮膚、呼吸道、頭發(fā)毛囊、胃腸道、膀膚等的上皮損傷的修復(fù)發(fā)揮重要作用，但是KGF的生物學(xué)性質(zhì)尚未*了解。本實驗旨在研究成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)對表皮細(xì)胞增殖的影響。方法取16-30歲患者手術(shù)切除的包皮修剪至全厚皮片，外分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞和表皮細(xì)胞，取第二代的成纖維細(xì)胞提取總RNA采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測人皮膚成纖維細(xì)胞中KGF基因的轉(zhuǎn)錄水平，對第2代的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞培養(yǎng)液用酶聯(lián)免疫吸附法((ELISA)檢測培養(yǎng)液中KGF的濃度，之后對第2代表皮細(xì)胞進行傳代，分別用K-SFM(不含KGF) }  K-SFM(含1 ng/mL的KGF) } DMEM(含10%的FBS)和成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)24h, 36h, 48h, 60h, 72h}用細(xì)胞計數(shù)法、MTT法和免疫熒光的方法檢測各實驗組培養(yǎng)液對表皮細(xì)胞增殖的促進作用。zui后對所得數(shù)據(jù)經(jīng)行統(tǒng)計學(xué)處理。

結(jié)果RT-PCR結(jié)果顯示，可擴增獲得KGF，說明人皮膚成纖維細(xì)胞中KGF轉(zhuǎn)錄水平顯著，酶聯(lián)免疫吸附法((ELISA)可檢測到人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中存在較高水平的KGF，細(xì)胞計數(shù)結(jié)果和MTT結(jié)果表明，添加KGF的K-SFM和成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液均能夠促進表皮細(xì)胞增殖，亦可保持表皮細(xì)胞的活性，并用免疫熒光檢測方法得出，人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中的KGF能夠與表皮細(xì)胞表面的KGF特異性受體相結(jié)合。結(jié)論本實驗得出體外分離培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞中KGF轉(zhuǎn)錄水平顯著，成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中較其他對照組能夠檢測到高濃度的KGF，且各組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.01)}說明成纖維細(xì)胞能夠合成和釋放KGF，且可與表皮細(xì)胞表面的KGF特異性受體相結(jié)合而發(fā)揮其特異性作用，成為其促進表皮細(xì)胞增殖的重要因素，從而促進創(chuàng)面修復(fù)的進程。