相對與酶聯(lián)免疫試驗,zui近我是發(fā)現(xiàn)了一種新型的免疫方法,為斑點免疫法,此特點 Dot-ELISA是由Hawkes等建立。用吸附蛋白質(zhì)能力很強的硝酸纖維素膜(NC膜)為載體,將少量抗原(1~2μL)點加于膜上,干燥后經(jīng)過封閉液處理;滴加待檢血清和酶標抗抗體(間接法),或是先在NC膜上滴加待檢血清(2~5tzL),干燥后加封閉液處理;滴加特異性抗原和酶標抗體(雙抗體夾心法)進行反應。
洗滌后滴加能形成不溶性有色沉淀的底物溶液(HRP常用二氨基聯(lián)苯胺、4-氯乙萘酚)。陽性反應在膜上出現(xiàn)肉眼可見的著色斑點。Dot-ELISA常用于篩選單克隆抗體雜交瘤細胞;在各種病毒性疾病和寄生蟲病的臨床診斷與血清流行病學調(diào)查中亦廣泛使用。
根據(jù)恒遠試驗得出此法具有以下優(yōu)點:
①特異性強,假陽性較少;
②敏感性高,NC膜對蛋白質(zhì)的吸附性能優(yōu)于聚苯乙烯,可檢出lng抗腺病毒IgC;檢出抗原的敏感性較常規(guī)ELISA法高6~8倍;
③試劑用量少,比ELISA法至少節(jié)約10倍;
④操作簡便快速,不需要特殊設(shè)備條件,適合基層單位使用;
⑤抗原膜保存期長,—20%可保存半年,不影響其活性;并可郵寄供現(xiàn)場流行病學調(diào)查使用;
⑥檢測結(jié)果可長期保存,便于復查。
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