了解酸性蛋白酶的活力測定方法，來滬鼎，搶先看！今天就是新年中的第二節(jié)氣雨水了，有的地方竟還是大雪紛揚的狀態(tài)中，上海已經(jīng)有春天的跡象了。旁余之話我們不多說，下面就直接進入主題，春來雨問：以何方法來做酸性蛋白酶的活力測定？
    我們今天選擇的方法叫做福林法，您是不是想要問為什么呢？上海滬鼎就來回答您這個問題，這時因為福林試劑在堿性條件下可被酚類化合物還原呈藍色反應，由于蛋白質(zhì)分子中有含酚基的氨基酸，它使蛋白質(zhì)及其水解產(chǎn)物呈上述反應，利用這個方法原理可以測定蛋白酶活力的強弱。
    當我們在選擇方法的時候要為實驗做一個分析，由各種條件來做設想，zui后選擇一個合適的方法來做實驗。由此方法設想，我們來看看，它需要用到的試劑。
    l、福林試劑
    2、0.4mol/l的TCA溶液
    3、0.8mol/l的碳酸鈉溶液
    4、pH值為3.6的醋酸緩沖液
    5、2%酪蛋白溶液
    6、100μg/ml酪氨酸溶液
    再下一步的工作就是來繪制標準曲線，每一個朋友都要學會去分析，還有每一步需要做哪些步驟。我們所配制濃度分別為(單位：μg/ml)：0、20、40、60、80、100的酪氨酸溶液，各取lml(做4個平行樣)，加入不同的試管中，再各加入已稀釋的福林試劑lml和0.4mol/l的碳酸鈉5ml，搖勻，置于水浴鍋中，40℃保溫發(fā)色20min。然后在721型分光光度計上進行比色測定(波長660nm，以濃度為0μg/ml的酪氨酸反應液做空白對照)。
    實驗到這里算是完成了一半了，上海滬鼎在這里小小的說明一下哦！我公司酸性蛋白酶CAS號為9025-49-4，這里就是要跟您說近些天購買是有*活動的，一個方面是元宵節(jié)的*還沒結(jié)束，還有就是二月至三月的春季*，這個時候購買可以享受7.8折優(yōu)惠，另外還送小禮物哦！好啦，下面就該到操作步驟的環(huán)節(jié)啦。
    活力測定操作步驟：稱取酶粉5g，充分碾細，加蒸餾水1000ml，在 4O℃水中攪拌3Omin，充分溶出酶蛋白，然后過濾，濾液用0.1mol/lpH值為3.6的醋酸緩沖液稀釋到一定倍數(shù)。取稀釋液1ml(做平行樣4個)，40℃水浴預熱2min，再各加入經(jīng)同樣預熱的酪蛋白1ml，保溫10min。然后立即加入 0.4mol/l三氯醋酸2ml，終止反應。繼續(xù)置水浴中保溫20min，使殘余蛋白質(zhì)沉淀，然后離心分離或過濾。取濾液lml，再加入0.8mol/l碳酸鈉溶液5ml和已稀釋的福林試劑1ml，搖勻保溫發(fā)色20min后，進行比色測定。對照標準曲線，計算酪氨酸的釋放量。
    zui后的一個方面就是計算，基本上來說，我們所做的實驗組成都是差不多的，都有原理技術(shù)等等之類的，要怎樣去計算呢？
    我們以酪蛋白為作用底物，在一定pH值和溫度下，同酶液反應，經(jīng)一段時間后加入三氯醋酸，終止酶的反應，并使殘余的酪蛋白質(zhì)沉淀，同水解產(chǎn)物分開。經(jīng)過濾后取過濾液(含蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物的三氯醋酸溶液)，用Na2C03堿化，再加入福林試劑使之發(fā)色。藍色反應的強弱與過濾波中蛋白水解產(chǎn)物的量成正比例，而水解產(chǎn)物的量又同酶活力成正比。因此，根據(jù)藍色反應的強弱可以計算出蛋白酶的活力。
蛋白酶活力=A×4×N/10
式中：A——對照標準曲線得出的酪氨酸釋放量 
4--4ml反應液取出1ml 
N--酶粉的稀釋倍數(shù) 
10——反應時間10min 
    本文到這里已經(jīng)為您說明完了用什么方法來做酸性蛋白酶的活力測定，以及其方法原因。了解我公司的產(chǎn)品價格以及其他信息都咨詢我公司哦！滬鼎生物的鈴聲期待因您撥而響起。