細(xì)胞培養(yǎng)所必需的L－谷氨酰胺在水溶液中性質(zhì)不穩(wěn)定，分解后會(huì)生成對(duì)細(xì)胞有害的氨。已知氨能夠抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)及目標(biāo)物的生成，于是人們開(kāi)始使用L－丙氨酰－L－谷氨酰胺（丙氨酰谷氨酰胺、Ala-GluNH2）來(lái)代替L－谷氨酰胺。丙氨酰谷氨酰胺是L－丙氨酸和L－谷氨酰胺縮合而成的二肽，在水溶液中的穩(wěn)定性高，不易生成氨，因此可以進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的培養(yǎng)。
    在此，我們將介紹使用L-8900型高速全自動(dòng)氨基酸分析儀，對(duì)包括丙氨酰谷氨酰胺在內(nèi)的42個(gè)氨基酸成分進(jìn)行測(cè)定的例子。本例中，我們分別采取生理體液分析和高分離度生理體液分析雙柱聯(lián)用方式進(jìn)行了測(cè)定，同時(shí)還將介紹添加了丙氨酰谷氨酰胺的培養(yǎng)基測(cè)定例。
 
■標(biāo)準(zhǔn)樣品與培養(yǎng)基的測(cè)定例（使用生理體液分析柱）
 
分析條件

氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定例

氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定例（各2 nmol/20 μL（部分成分除外）） 

 

樣品前處理

 
添加了Ala-GluNH2的培養(yǎng)基的測(cè)定例 

添加了Ala-GluNH2的培養(yǎng)基的測(cè)定例（前處理后進(jìn)樣20 μL）

   使用生理體液分析柱對(duì)42個(gè)氨基酸成分進(jìn)行了測(cè)定。在標(biāo)準(zhǔn)分析方法中，Ala-GluNH2的出峰位置與Cys重疊，但對(duì)梯度程序進(jìn)行了優(yōu)化后，便可以分離出Ala-GluNH2的峰，從而可以與其他氨基酸一樣對(duì)該二肽進(jìn)行定性和定量分析。
 
■標(biāo)準(zhǔn)樣品與培養(yǎng)基的測(cè)定例（高分離度生理體液分析雙柱聯(lián)用）
 
分析條件
 

 
氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定例

氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定例（各2 nmol/20 μL（部分成分除外））
 

樣品前處理
 

 
添加了Ala-GluNH2的培養(yǎng)基的測(cè)定例

添加了Ala-GluNH2的培養(yǎng)基的測(cè)定例（前處理后進(jìn)樣20 μL）

    如果采用高分離度生理體液分析雙柱聯(lián)用，可以進(jìn)行更高分離度的測(cè)定。由于雙柱聯(lián)用可以通過(guò)將兩根色譜柱串聯(lián)的結(jié)構(gòu)對(duì)壓力進(jìn)行分散，因此能夠?qū)崿F(xiàn)高速、高分離度的分析。這樣不僅可以*分離Val 和Ala-GluNH2，而且還能夠改善中間洗脫出的Ile、Leu、Tyr的峰形，實(shí)現(xiàn)更高精度的定量分析。

氨基酸成分名列表



本例使用日立L-8900全自動(dòng)氨基酸分析儀進(jìn)行測(cè)定，關(guān)于此儀器請(qǐng)參考：http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102446/C138114.htm

關(guān)于日立高新技術(shù)公司:

　　日立高新技術(shù)公司是一家雇員超過(guò)10,000人，有百余處經(jīng)營(yíng)網(wǎng)點(diǎn)的跨國(guó)公司。企業(yè)發(fā)展目標(biāo)是“成為獨(dú)步的高新技術(shù)和解決方案提供商”，即兼有掌握技術(shù)水準(zhǔn)的開(kāi)發(fā)、設(shè)計(jì)、制造能力和滿(mǎn)足企業(yè)不同需求的解決方案提供商身份的綜合性高新技術(shù)公司。日立高新技術(shù)公司的生命科學(xué)系統(tǒng)本部，通過(guò)提供的科學(xué)儀器，提高了分析技術(shù)和工作效率，有力推進(jìn)了生命科學(xué)領(lǐng)域的研究開(kāi)發(fā)。我們衷心地希望通過(guò)所有的努力，為實(shí)現(xiàn)人類(lèi)光明的未來(lái)貢獻(xiàn)力量。

　　更多信息請(qǐng)關(guān)注日立高新技術(shù)公司：http://www.hitachi-hitec.cn