雙波長分光光度法的基本原理及應(yīng)用

應(yīng)用分光光度法對(duì)共存組分進(jìn)行不分離定量測(cè)定時(shí)，通常采用的方法有雙波長法，三波長法，導(dǎo)數(shù)光譜法、差譜分析法及多組分分析法等方法，其快速，簡便的優(yōu)點(diǎn)使這些方法在實(shí)用分析中得到越來越廣泛的應(yīng)用。其中以雙波長法的應(yīng)用為zui多，該法的準(zhǔn)確度和精密度要高于其它方法，是對(duì)共存組分不分離定量測(cè)定的有效方法之一。

實(shí)用中的雙波長法主要采用等吸收波長法和系數(shù)倍增法兩種分析方法，下面就其基本原理和應(yīng)用作以介紹：

一、等吸收波長法

1、基本原理

圖1是同一組分三個(gè)不同濃度供試液的吸收光譜圖，經(jīng)典分光光度法的定量測(cè)定通常是在被測(cè)組分的zui大吸收波長處進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)蘭伯一比耳定律，其吸光度值與被測(cè)組分的濃度C成正比，即：

依（3）式測(cè)定被測(cè)組分a，則可*消除b組分的干擾，達(dá)到共存組分不分離進(jìn)行定量測(cè)定的目的。

2、影響因素

（1）測(cè)定波長和組合波長的選擇應(yīng)使被測(cè)組分的△A值盡可能大，以增加測(cè)定的靈敏度和度。

（2）測(cè)定波長和組合波長應(yīng)盡可能選擇在光譜曲線斜率變化較小的波長處，以減小波長變化對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。

（3）干擾組分等吸收波長（組合波長）的選擇必須，只有其△A值等于零時(shí)才能*消除干擾，否則會(huì)引入測(cè)定誤差。為此，在實(shí)用分析中，都是先配制一個(gè)干擾組分b的供試液，在儀器上準(zhǔn)確找出等吸收波長 ，然后再對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。

3 應(yīng)用實(shí)例

等吸收波長法的一個(gè)典型應(yīng)用實(shí)例為收載于《中華人民共和國藥典》中的抗菌消炎藥復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量測(cè)定。復(fù)方磺胺甲噁唑片中含有磺胺甲噁唑（SMZ）和甲氧芐（TMP）兩個(gè)成分，其吸收光譜見圖3。

當(dāng)測(cè)定SMZ時(shí)，選擇其zui大吸收波長257nm為測(cè)定波長，可以在干擾組分TMP的光譜曲線上304nm附近找到等吸收波長為組合波長消除其干擾；當(dāng)測(cè)定TMP時(shí)，選擇239nm為測(cè)定波長，可以在干擾組分SMZ的光譜曲線上295nm附近找到等吸收波長為組合波長消除其干擾，分別對(duì)SMZ和TMP進(jìn)行含量測(cè)定。

二、系數(shù)倍增法

1 基本原理

當(dāng)測(cè)定被測(cè)組分時(shí)，并非都能在干擾組分的光譜曲線上找到等吸收波長（見圖4），這時(shí)，如果能在干擾組分b的光譜曲線上找到對(duì)應(yīng)于被測(cè)組分a光譜曲線無吸收的組合波長

λ2，即可采用系數(shù)倍增法進(jìn)行測(cè)定。

設(shè)被測(cè)組分的測(cè)定波長為λ1，在此波長處被測(cè)組分a和干擾組分b均有吸收，在組合波長λ2處，被測(cè)組分a無吸收而干擾組分b有吸收，用干擾組分b的對(duì)照品在λ1和λ2波長處測(cè)定吸光度，其比值為一常數(shù)K，可按下式計(jì)算，求得被測(cè)組分的吸光度值，再計(jì)算其含量。

2 影響因素

（1）測(cè)定波長與組合波長應(yīng)盡可能選擇在光譜曲線斜變化較小的波長處，以減小波長變化對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。

（2）組合波長λ2必須選擇在被測(cè)組分無吸收干擾組分有吸收的波長處，這時(shí)共存組分在組合波長λ2處測(cè)得的吸光度值為干擾組分的凈吸光度值。

（3）先用干擾組分的對(duì)照品，在測(cè)定波長λ1和組合波長λ2處準(zhǔn)確測(cè)定吸光度值，求得常數(shù)K，然后才能計(jì)算出共存組分中干擾組發(fā)b在λ1波長處的吸光度值A(chǔ)bλ2。

3 應(yīng)用實(shí)例

系數(shù)倍增法一個(gè)典型應(yīng)用實(shí)例為收載于日本藥局方中的解熱鎮(zhèn)痛藥阿斯匹林鋁的含量測(cè)定，阿斯匹林鋁中因含有分解產(chǎn)物游離子楊酸而干擾其測(cè)定。

圖5中的a為純阿斯匹林鋁的光譜曲線，b為水楊酸對(duì)照品的光譜曲線，c為含游離子楊酸的阿斯匹林鋁光譜曲線，在阿斯匹林鋁的測(cè)定波長278nm處水楊酸有干擾，而在水楊酸的zui大吸收波長308nm處，阿斯匹林鋁已無吸收。當(dāng)用水楊酸對(duì)照品測(cè)得AS’和AS的比值K后，即可用系數(shù)倍增法對(duì)含有游離水楊酸的阿斯匹林鋁進(jìn)行含量測(cè)定。

三、結(jié)語

雙波長分光光度法在對(duì)共存組分不分離定量測(cè)定時(shí)操作簡便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，在普通分光光度計(jì)上均可進(jìn)行測(cè)定。目前，雙波長分光光度法已在新一代電子計(jì)算機(jī)控制的分光光度計(jì)如普析通用公司TU－1800PC，TU－1901等儀器上被設(shè)計(jì)為一種的測(cè)定如計(jì)算程序，使得采用這一分析方法進(jìn)行的測(cè)定和計(jì)算均可自動(dòng)進(jìn)行，因此，雙波長分光光度法解決共存組分不分離定量測(cè)定中必將得到廣泛的應(yīng)用。