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說明：考馬斯亮蘭法（Bradford 法），是目前靈敏度zui高的蛋白質(zhì)測定法之一?？捡R斯亮蘭
G-250 染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的zui大吸收峰由 465nm 變?yōu)?595nm，溶
液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。在595nm 下測定的吸光度值A(chǔ)595，與蛋白質(zhì)濃度成正比。
包裝：
考馬斯亮蘭溶液 300 毫升
蛋白標(biāo)準(zhǔn)（BSA ） 10 毫升（1mg/ml）
產(chǎn)品說明書 1 份
保存： 2℃-8 ℃ （BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)-20℃）
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 從冰箱取出考馬斯亮蘭溶液，平衡至室溫并混勻；預(yù)熱分光光度計(jì)20 分鐘或酶標(biāo)儀。
2. 以分光光度計(jì)測;準(zhǔn)備九支管，分別編號(hào)，按下列順序加樣。
編號(hào) 1 2 3 4 8 6 7 8 9
去離子水μl 100 90 80 60 40 20 0
蛋白標(biāo)準(zhǔn)μl 0 10 20 40 60 80 100
樣品μl 100 100
考馬斯亮蘭溶液ml 3 3 3 3 3 3 3 3 3
混勻、，2~5分鐘后，以第1 號(hào)試管為空白對(duì)照595nm，測定各樣品收值A(chǔ)595，樣品管8、
9 取平均值
相當(dāng)濃度mg/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
注：樣品和試劑比可以按比例放大或縮小。
微孔檢測時(shí)，可以按比例縮小，但總體積不小于100ul。
性能指標(biāo)：
在20～1200ug/ml 有著比較好的線性。當(dāng)吸光度大于0.8A 時(shí)，請把樣本稀釋后再做。
注意：
1.使用塑料或玻璃比色皿。如使用石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇蕩洗，以
洗去染色用完后
可以乙醇反復(fù)清洗。塑料比色皿決不可用乙醇或丙酮長時(shí)間浸泡。
2.本方法標(biāo)準(zhǔn)曲線有輕微的非線性，因而不能用Beer 定律進(jìn)行計(jì)算，而只能用標(biāo)準(zhǔn)曲線來
測定
3.比色順序從蛋白濃度低的管開始，中間不必清洗比色杯，以免影響結(jié)果。
4.疏水蛋白或粘蛋白，可能與染料發(fā)生沉淀，加入等體積1N NaOH 可以消除。
5.如果知道樣品的蛋白大體濃度，可以采用相近的3 管做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6. 由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford 法用于不同蛋白
質(zhì)測定時(shí)有較大的
偏差，在制作 標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)通常選用 g—球蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，以減少這方面的偏差。
7. 有一些物質(zhì)干擾此法的測定，主要的干擾物質(zhì)有：去污劑、 Triton X-100 、十二烷基硫
酸鈉（SDS ）和 0.1N
的NaOH。（如同0.1N 的酸干擾Lowary 法一樣）。
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