手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
上海滬峰是一家專業(yè)經營生物、儀器、試劑耗材的公司，在廣大用戶的幫助和支持下，經過不懈的努力，已成為國內生命科學領域產品的主要供應商之一，代理許多*水平的高科技產品，包括分子生物學、細胞生物學、免疫學、診斷等多個研究及應用領域。公司的服務和業(yè)務網絡遍及全國，在同行獲得*。
要一次進行這么多種反應，我們當然不想在反應中缺了哪個組分。一般多重PCR需要更多的dNTP、鎂離子和聚合酶。Nichols推薦使用0.3 mM dNTP（而非標準的0.2 mM）、2.5 mM Mg2+（而非1.2至2 mM）以及每50μL反應體系5 units聚合酶（而非1.25 units）。zui后再試試鹽濃度，“在優(yōu)化的時候，增加鹽總會有幫助，尤其能增加特異性。”
PCR master mix含有緩沖液、鹽、dNTP、Mg和聚合酶，如果我們使用常規(guī)1.25× 或1.5×的PCR master mix就已經差不多做到了上述原則的三至五。另外，您還可以選用轉為多重PCR優(yōu)化的產品，例如NEB的多重PCR 5× Master Mix、Bio-Rad的iQ™ Multiplex Powermix、或者安捷倫的Brilliant Multiplex QPCR Master Mix。
據安捷倫的Mason介紹，Brilliant Multiplex QPCR Master Mix是經過專門設計的，能夠很好的解決同一管中不同反應相互競爭的問題。如果一個目標片段出現(xiàn)1000次，而另一個目標片段只出現(xiàn)了10次，那么后一個片段就很容易淪為背景。“我們的多重PCR試劑盒能夠在同一個管中準確定量低豐度和高風度的目標片段，克服偏向性，”Mason說。
據安捷倫的Mason介紹，Brilliant Multiplex QPCR Master Mix是經過專門設計的，能夠很好的解決同一管中不同反應相互競爭的問題。如果一個目標片段出現(xiàn)1000次，而另一個目標片段只出現(xiàn)了10次，那么后一個片段就很容易淪為背景。“我們的多重PCR試劑盒能夠在同一個管中準確定量低豐度和高風度的目標片段，克服偏向性，”Mason說。
我能擴多少目標片段一般來說，zui多能在同一個管中同時檢測到五個目標片段，這既是出于引物設計的考慮，也是由多重定量PCR的硬件條件決定的。實時熒光PCR儀通常zui多檢測4至5個顏色通道，其中一個可能還要留作參考通道。凝膠電泳雖然不受此限制，但多引物一同作用仍然存在困難，因此還是zui多達到五重PCR。 “設計更多是挑戰(zhàn)性的，”Cockrum說。
多重定量PCR的染料能進行多重定量PCR的儀器包括：Life Tech公司的QuantStudio™ 12K Flex Real-Time PCR System、安捷倫公司的Mx30005P等等。目前zui流行的選擇是HEX、FAM和VIC，而FAM/HEX和FAM/VIC是用的zui普遍的。Life Tech除了生產VIC外，近期又發(fā)布了兩個新染料ABY和JUN以及一個新passive reference dye——Mustang Purple。
多重定量PCR的染料能進行多重定量PCR的儀器包括：Life Tech公司的QuantStudio™ 12K Flex Real-Time PCR System、安捷倫公司的Mx30005P等等。目前zui流行的選擇是HEX、FAM和VIC，而FAM/HEX和FAM/VIC是用的zui普遍的。Life Tech除了生產VIC外，近期又發(fā)布了兩個新染料ABY和JUN以及一個新passive reference dye——Mustang Purple。
Cockrum建議將染料強度與模板豐度結合起來，用zui亮的染料（通常是FAM）配zui少的模板，用zui黯淡的染料（例如Cy5或Quasar 705）配豐度zui高的模板（如看家基因）。
更多重的PCR當然，引物設計是多重PCR的zui大障礙，不過一旦克服了這一障礙我們就能進行更多重的PCR反應。安捷倫的MassCode技術就能夠超越定量PCR儀帶來的硬件限制，安捷倫公司將這一技術推薦給那些想要同時篩選十個以上目標片段的用戶，例如可以用來檢測病原體。
更多重的PCR當然，引物設計是多重PCR的zui大障礙，不過一旦克服了這一障礙我們就能進行更多重的PCR反應。安捷倫的MassCode技術就能夠超越定量PCR儀帶來的硬件限制，安捷倫公司將這一技術推薦給那些想要同時篩選十個以上目標片段的用戶，例如可以用來檢測病原體。
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心