突破性的蛋白A定量系統(tǒng)

海滬峰是中國(guó)大、品種zui齊全的食品安全檢測(cè)試劑盒和動(dòng)物疫病診斷試劑盒的生產(chǎn)廠家，產(chǎn)品技術(shù)水平達(dá)到國(guó)內(nèi)*、世界水平，并在世界上開發(fā)出呋喃西林代謝物檢測(cè)試劑盒、呋喃妥因代謝物快速檢測(cè)試劑盒等35種食品安全檢測(cè)試劑盒，20種動(dòng)物疫病診斷試劑盒以及8種膠體金快速檢測(cè)卡，公司為了適應(yīng)市場(chǎng)發(fā)展的需要，正在進(jìn)行上百種試劑盒的研發(fā)，不久即將上市銷售。

工藝雜質(zhì)的去除是生物制藥產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵一步，且監(jiān)管指引要求鑒定出純化過程中各個(gè)階段的雜質(zhì)。在商業(yè)化重組單克隆抗體生物藥品的純化過程中，含有固定化葡萄球菌蛋白A（天然蛋白A）、重組蛋白A（rPA）或蛋白A亞基（MabSelect SuRe™）的純化樹脂被廣泛使用。必須對(duì)濾出的蛋白A進(jìn)行靈敏分析，以確保此污染物不以不可接受的水平存在于終產(chǎn)品中。

目前定量蛋白A的方法（如ELISA）受到種種限制，如動(dòng)態(tài)范圍窄、靈敏度低和流程費(fèi)時(shí)費(fèi)力。通常需要對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行多次稀釋或開展重復(fù)分析，才能獲得落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)的結(jié)果。
ProteinSEQ™ 蛋白A定量系統(tǒng)

Life Technologies的ProteinSEQ™ 蛋白A定量系統(tǒng)是一個(gè)突破性的免疫分析平臺(tái)，它將基于TaqMan® Assay的qPCR分析的靈敏度和動(dòng)態(tài)范圍帶到以抗體為基礎(chǔ)的蛋白分析物檢測(cè)中。系統(tǒng)借助鄰位連接分析（proximity ligation assay，簡(jiǎn)稱PLA）技術(shù)來定量某一目標(biāo)蛋白。
為了實(shí)現(xiàn)zui寬的動(dòng)態(tài)范圍、zui高的靈敏度和重復(fù)性，他們開發(fā)出一種自動(dòng)化、基于磁珠的固相PLA平臺(tái)，適用于MagMAX™ Express-96磁珠處理器。簡(jiǎn)單的流程僅包含三步（圖1）。*步，制備待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。樣品制備包含簡(jiǎn)單的加熱/冷卻/離心過程，讓與蛋白A分析物結(jié)合的IgG變性和分離。下一步，設(shè)置平板，而目標(biāo)蛋白的捕獲和探針連接都在MagMAX™ Express-96儀器上自動(dòng)完成。簡(jiǎn)單來說，與鏈霉親和素包被磁珠偶聯(lián)的生物素化的蛋白A抗體可用于捕獲蛋白A。洗滌之后，鄰位探針（結(jié)合有寡核苷酸的蛋白A抗體）與蛋白A目標(biāo)結(jié)合。一旦與目標(biāo)蛋白結(jié)合，探針相互靠近，在與鄰位探針雜交的夾板寡核苷酸（splint oligo）存在時(shí)由連接酶連接。zui后一步，通過qPCR擴(kuò)增連接產(chǎn)物，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定目標(biāo)蛋白的量。