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人甲胎蛋白異質(zhì)體3ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本：血清或血漿
本公司專業(yè)elisa試劑盒供應(yīng)商/代理商，質(zhì)量保證，價格低，是國家重點實驗室及國內(nèi)各大院校長期供應(yīng)商，
各種種屬 ：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊；標本 ：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水等 ；本公司實驗室*提供代測服務(wù)，詳細信息?。?6- / 31255782
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：www.shfsbio.com
人甲胎蛋白異質(zhì)體3ELISA 檢測試劑盒試驗原理：
AFP-L3試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知AFP-L3濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將AFP-L3和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中AFP-L3的濃度呈比例關(guān)系。
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶標板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型
塑料膜板蓋1塊半塊即用型
標準品：40ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀
空轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型
標準品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型
生物素標記的抗AFP-L3抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型
親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型
洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋
底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
標本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型
自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
1．試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
2．實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
1．標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
40 ng/ml（6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
20 ng/ml（5號標準品）100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 ng/ml（4號標準品）100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 ng/ml（3號標準品）100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 ng/ml（2號標準品）100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
1.25 ng/ml（1號標準品）100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml（空轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實驗方案
標準品濃度（ng/ml）
A4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F1.251.25樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
人甲胎蛋白異質(zhì)體3ELISA 檢測試劑盒
局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的AFP-L3標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的AFP-L3含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍：0-40ng/ml
4、敏感度： 0.1 ng/ml
山羊磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）ELISA試劑盒Goat Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK ELISA試劑盒
山羊P選擇素（P-Selectin/CD62P/GMP140）ELISA試劑盒Goat P-Selectin/CD62P/GMP-140 ELISA試劑盒
山羊促生長激素釋放激素（GHRH）ELISA試劑盒Goat growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA試劑盒
山羊生長激素釋放多肽（GHRP）ELISA試劑盒Goat Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA試劑盒
山羊白介素4（IL-4）ELISA試劑盒 Goat Interleukin 4,IL-4 ELISA試劑盒
山羊白介素10（IL-10）ELISA試劑盒Goat Interleukin 10,IL-10 ELISA試劑盒
山羊腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒 Goat Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA試劑盒
山羊β內(nèi)啡肽（β-EP）ELISA試劑盒Goat Beta-Endorphin,β-EP ELISA試劑盒
山羊丙酮檢測（acetone）ELISA試劑盒 Goat acetone ELISA試劑盒
鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3（IGFBP-3）ELISA試劑盒Deer Insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3 ELISA試劑盒
鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（eNOS）ELISA試劑盒Deer Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA試劑盒
鹿血清淀粉樣蛋白A（SAA）ELISA試劑盒Deer Serum amyloid A,SAA ELISA試劑盒
鹿紅細胞膜蛋白（EMP）ELISA試劑盒Deer erythrocyte membrane protein,EMP ELISA試劑盒
雙氫睪酮（DHT）ELISA試劑盒 Rabbit Dihydro testosterone,DHT ELISA試劑盒
兔核因子κB亞基p65親和肽（NF-κB p65）ELISA試劑盒Rabbit nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA試劑盒
兔粒細胞集落刺激因子（G-CSF）ELISA試劑盒Rabbit Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA試劑盒
兔血清淀粉樣蛋白A（SAA）ELISA試劑盒Rabbit Serum amyloid A,SAA ELISA試劑盒
兔結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白（Hpt/HP）ELISA試劑盒Rabbit Haptoglobin,Hpt/HP ELISA試劑盒
兔子α2抗纖溶酶（α2-AP）ELISA試劑盒 Rabbit α2-Antiplasmin,α2-AP ELISA試劑盒
兔子纖溶酶原（Plg）ELISA試劑盒 Rabbit Plasminogen,Plg ELISA試劑盒
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