研究人員改進(jìn)從酵母中提取gDNA的方法

背景：

細(xì)胞壁是快速裂解酵母細(xì)胞的主要障礙。從酵母細(xì)胞中制備gDNA的傳統(tǒng)方法包括使用破壁酶和玻璃珠，之后通過去垢劑裂解細(xì)胞，并利用酚-氯仿提取gDNA。在分析大量樣品時(shí)，這些方法相當(dāng)耗時(shí)，也相對(duì)較貴。

在快速分析時(shí)，也可以通過反復(fù)凍融裂解細(xì)胞。盡管這種方法相對(duì)較快，但是在氯仿抽提之后需要將樣品轉(zhuǎn)移至新的管中，這對(duì)于大量樣品的同時(shí)抽提就不太方便。另外，還有一種更為簡(jiǎn)單的SDS處理方法。不過，似乎產(chǎn)量較低，結(jié)果重復(fù)性不太好。

方法改進(jìn)：

由于酵母轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中常常使用醋酸鋰（LiOAc）來弱化細(xì)胞壁，故我們決定將它與SDS結(jié)合，來開發(fā)一種從酵母中提取gDNA的快速、方法。

我們從YPD平板上挑了8個(gè)釀酒酵母的單克隆，重懸在100 µL 200 mM LiOAc和1% SDS的溶液中，并在70°C孵育15分鐘。孵育之后，加入300 µL 96%乙醇，渦旋振蕩混合樣品，并以15000x g離心3分鐘，收集DNA。將DNA沉淀溶解在100 µL TE中，通過短暫離心（15000x g，1分鐘）去除細(xì)胞碎片，之后取1 µL上清進(jìn)行PCR。

我們?cè)诓煌姆磻?yīng)中擴(kuò)增了兩個(gè)不同的gDNA片段，大小分別為489 bp和2383 bp，并在0.9%的瓊脂糖凝膠中分析了PCR產(chǎn)物。我們發(fā)現(xiàn)，通過LiOAc-SDS方法制備的所有樣品都能擴(kuò)增出兩個(gè)片段。

結(jié)論：

我們開發(fā)出一種從酵母中提取gDNA的快速可靠方法，適用于3500 bp以下的DNA片段的擴(kuò)增。整個(gè)過程可在15分鐘內(nèi)完成，不需要更換離心管，相當(dāng)方便。液體和固體培養(yǎng)基的細(xì)胞都可使用。此方法適用于酵母重組子的快速篩選或酵母的常規(guī)基因分型。

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