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大鼠腦組織石蠟切片的操作步驟
在取材前一般要對大鼠進(jìn)行灌注。
石蠟的過程如下：
1. 前固定：腦組織經(jīng)心臟灌流進(jìn)行前固定——麻醉動物，暴露心臟，從左心室灌注生理鹽水或0.1M PBS幾百毫升（一般為動物體積2－3倍），同時在右心房剪一口。然后再灌注幾百體積4％多聚甲醛等固定液。
2. 后固定：取腦，置于固定液中后固定液24小時。
3. 脫水: 從低濃度酒精到高濃度酒精依次：（注意：高濃度酒精時間不能太長，否則組織易碎。）70%酒精可過夜 80%酒精2小時 95%酒精1小時兩次 100%酒精1小時兩次。（50%酒精6小時,70%4小時,80%4小時,90%過夜，95%1.5小時x 4次 無水1.5小時x4次）
4. 透明: 1：1的酒精和二甲苯1小時 常用二甲苯, 一般浸泡30－45min即可。（二甲苯透明 10分x4次）
5. 浸蠟: 組織經(jīng)透明后放入熔化的軟蠟（熔點為52－54℃）內(nèi)，2小時；然后入硬蠟（熔點56－58℃）2－3小時。 6.包埋: 將熔化的石蠟倒入包埋框再將組織塊放入，放入時不能有氣泡.（ 注意：1.包埋面必須平整，否則不好切片！2.建議石蠟反復(fù)融化幾次，以使其變得更加致密，便于以后切片。）
7.切片：組織厚度2mm 建議：大鼠腦大，若不影響實驗可切開。
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灌注方法一般是經(jīng)升主動脈灌注，先用生理鹽水（37℃）快速灌注5min（60 ml）左右以移除血液，或者先用冰冷pbs灌注，針頭扎在左心室，右心房剪開，直到肝臟發(fā)白（防止殘留的血液導(dǎo)致非特異性染色）。然后用4％多聚甲醛0.1M磷酸緩沖液（pH 7.4）（4℃）400ml－500ml灌注固定，直到動物的肝臟發(fā)硬，尾巴僵直。完成灌注。動物放置4度冰箱保存2小時，然后取腦，繼續(xù)保存在4%多聚甲醛/pbs中4度冰箱過夜（不要超過24h），第二天轉(zhuǎn)移至30%蔗糖脫水至沉低。然后做病理試驗（中性福爾馬林固定24h內(nèi)脫水石蠟包埋）。
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