內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是由一層單位膜圍成的連續(xù)的網(wǎng)狀膜系統(tǒng)，可分為糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（Rough Endoplasmic Reticulum，RER）和光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（Smooth Endoplasmic Reticulum，SER）。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色的意義

1、觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)結(jié)構(gòu)：

染色后可以在顯微鏡下清晰地觀察到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的形態(tài)、大小、分布以及與其他細(xì)胞器的關(guān)系。這有助于深入了解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在不同細(xì)胞類型、不同生理狀態(tài)下的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，為研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能提供基礎(chǔ)。

2、疾病診斷

在某些疾病狀態(tài)下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的結(jié)構(gòu)和功能會(huì)發(fā)生改變。通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色可以觀察到這些變化，為疾病的診斷提供線索。例如，在一些神經(jīng)退行性疾病、肝臟疾病和癌癥中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的形態(tài)和分布可能會(huì)出現(xiàn)異常。

3、病理機(jī)制研究：

有助于研究疾病發(fā)生發(fā)展的病理機(jī)制。例如，在一些內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)疾病中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色可以揭示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的程度和持續(xù)時(shí)間，以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)細(xì)胞功能和存活的影響。

ER-Tracker介紹

ER-Tracker是一種用于標(biāo)記和研究細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的熒光探針。它能夠特異性地結(jié)合內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，發(fā)出明亮的熒光信號(hào)，使研究人員能夠在顯微鏡下清晰地觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)變化。ER-Tracker廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，為研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能和相關(guān)疾病提供了重要的工具。

應(yīng)用原理

ER-Tracker通常是一種小分子熒光染料，其分子結(jié)構(gòu)中含有能夠與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性結(jié)合的基團(tuán)。當(dāng)ER-Tracker進(jìn)入細(xì)胞后，會(huì)通過擴(kuò)散或主動(dòng)運(yùn)輸?shù)确绞竭M(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，并與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的特定分子結(jié)合。這種結(jié)合是高度特異性的，使得ER-Tracker能夠在細(xì)胞內(nèi)選擇性地標(biāo)記內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而不與其他細(xì)胞器發(fā)生非特異性結(jié)合。不像傳統(tǒng)的DiOC6(3)，該系列探針幾乎不對(duì)線粒體著色，且在較低濃度即可實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對(duì)細(xì)胞幾乎無毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對(duì)活細(xì)胞染色后用醛固定，可以部分保留活細(xì)胞的染色特征。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。≤-20℃避干燥保存，一年效期。避免反復(fù)凍融。

使用方法

1. 使用前將ER-Tracker Blue-White DPX 回溫至室溫，并簡(jiǎn)短離心使該DMSO溶液至管底。

2. 將1 mM ER-Tracker Blue-White DPX儲(chǔ)存液按照實(shí)驗(yàn)要求稀釋至工作濃度，推薦工作濃度 100 nM-1µM。建議在不影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下盡量使用較低濃度探針，以避免由于濃度過高染色導(dǎo)致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg）稀釋該探針進(jìn)行染色，可得到最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3. 染色對(duì)于貼壁細(xì)胞，吸除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基，用HBSS清洗細(xì)胞，加入預(yù)熱的染料工作液于37℃孵育細(xì)胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)液，并在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。

注：由于ER-TrackerBlue-White DPX 探針具有較高光敏感性，會(huì)產(chǎn)生波動(dòng)較大的發(fā)射吸收峰值，使用長(zhǎng)通 DAPI 濾光片效果理想。另，操作過程中需盡量避光。

常見問題

Q: 請(qǐng)問固定后的死細(xì)胞還能染上嗎？

A: 該探針主要染的是活細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，固定樣本基本染不上色。

Q: 染色之后可以加抗熒光淬滅劑防止熒光淬滅嗎？

A: 活細(xì)胞的染色，不需要加抗熒光淬滅封片液。

Q: 請(qǐng)問mito-tracker green 和 ER-traker red是同時(shí)染還是分開依次染，染完后熒光可持續(xù)多久（也就是在多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)還可以檢測(cè)）？

A: 建議分開依次染色，熒光均存在淬滅的現(xiàn)象，染色完建議盡快檢測(cè)，一般1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)熒光強(qiáng)度基本變化不大。

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