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質粒pYES2的篩選標志為URA，可用SD-URA板板進行篩選。BY4742感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pYES2質粒檢測轉化效率>104cfu/μg DNA。
操作說明：
1、取一支無菌的1.5mlEP管，依次加入預冷的目的質粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重復一次)，100µl冰上融化的AH109感受態(tài)細胞，PEG/LiAc500µl，輕輕翻轉混勻6-8次；
2、30℃水浴30min，每10min輕輕翻轉混勻6-8次；
3、每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉化效率，可不做）
4、42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉混勻6-8次；
5、12000rpm瞬時離心棄上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃復蘇1h；（用于提高轉化效率，可不做）
6、12000rpm瞬時離心棄上清，用100µl0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養(yǎng)48-96h。
注意事項：
1、感受態(tài)細胞最好在冰上融化。
2、若使用pYES2質粒表達蛋白，需在培養(yǎng)基中加入2%的半乳糖（篩選培養(yǎng)基中不用加半乳糖；當需要目的蛋白表達時，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源），以誘導目的基因的表達。
3、轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。
4、同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。
5、酵母為真核生物，不易長期保存，隨感受態(tài)在-80℃保存時間的延長，轉化效率會不斷下降，建議保存時間不超過90天。
6、BY4742酵母菌株對高溫敏感，適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉化效率呈指數下降。
7、酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克?。煌縎D單缺平板29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。
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