各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒

規(guī)格： 200 mL/kit

保存： 本產(chǎn)品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。

產(chǎn)品組成：

操作步驟：(僅供參考)

客戶可依據(jù)血液樣本量大小，選擇適宜的分離方式：

分離方案一

1. 新鮮抗凝全血用 1XPBS 按 1:1 稀釋，在離心管中先加入 4mL 試劑 A，后將 2mL 試劑 C 沿管壁緩慢滴加（建議使用巴氏吸管并 45°傾斜試管）于試劑 A 之上，形成梯度界面，將懸液小心平鋪于分離液液面上方。注意分離液與樣本總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果。

2. 室溫條件下水平轉子 600-1000g，25-30minutes（血液體積越大所需離心力越大，離心時間越長，最佳分離條件需摸索，離心最大轉速不超過 1000g）。

3. 離心后，上層白膜層為單個核細胞層，下層白膜層為粒細胞層（受個體差異及分離條件影響，粒細胞層可能會存在不同程度的紅細胞污染）。

4. 吸取粒細胞層及其上方 1ml 左右分離液至新的離心管中，加入 10mL 細胞洗滌液洗滌細胞。250g，離心 10min（如有紅細胞污染可依據(jù)樣本體積加入適量紅細胞裂解液祛除污染）。

5. 棄上清，加入 10mL 細胞清洗液重懸細胞，250g，離心 10min。

6. 棄上清，重懸細胞備用。

分離方案二

1. 沉降去除紅細胞：取新鮮抗凝血與血液稀釋液（注射用生理鹽水或 1XPBS）及紅細胞沉降液按照 1:1:1 比例混勻，室溫下靜置 30-40min 后，可見紅細胞沉于試管底部，小心吸盡上清層（富含白細胞及血小板）用于后續(xù)細胞分離。

2. 樣本分離：在 15mL 離心管中先加入 4mL 試劑 A，后將 2mL 試劑 C 沿管壁緩慢疊加（45°傾斜試管）于試劑 A 之上，形成梯度界面，將懸液小心平鋪于分離液液面上方。

3. 離心后，上層白膜層為單個核細胞層，下層白膜層為粒細胞層（受個體差異及分離條件影響，粒細胞白膜層可能會出現(xiàn)顏色較淺的情況）。

4. 吸取粒細胞層及其上方 1ml 左右分離液至新的離心管中，加入 10mL 細胞洗滌液洗滌細胞。250g，離心 10min（如有紅細胞污染可依據(jù)樣本體積加入適量紅細胞裂解液祛除污染）。

5. 棄上清，加入 10mL 細胞清洗液重懸細胞，250g，離心 10min。

6. 棄上清，重懸細胞備用。

注意事項：

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免微生物污染。

B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層不清晰。

C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血 2h 以內(nèi)），為保持中性粒細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。

D. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。

E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。

F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉數(shù)和離心時間，摸索最佳的分離條件。

G. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，注意全程保持無菌操作，避免微生物污染。

H. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。