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發(fā)光免疫分析試劑是指利用特異的抗原抗體反應(yīng)等生物學(xué)原理，利用發(fā)光信號來進(jìn)行檢測的一類試劑。主要包括化學(xué)發(fā)光（酶促，非酶促），電化學(xué)發(fā)光和時間分辨熒光等法。
該指導(dǎo)原則主要適用于用發(fā)光分析技術(shù)對蛋白質(zhì)等被測物質(zhì)進(jìn)行檢測的第三類試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制。第二類試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制可參考該指導(dǎo)原則執(zhí)行，國家食品藥品監(jiān)督管理部門將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時組織修訂。
一、基本原則
（一）研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。
（二）診斷試劑的生產(chǎn)必須按《藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理規(guī)范》及（體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)則）組織生產(chǎn)；企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員，相適應(yīng)的儀器設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境。
（三）診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。
（四）研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。
（五）生產(chǎn)和質(zhì)量控制總體目標(biāo)應(yīng)保證產(chǎn)品使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定，工藝可控，使用有效。
二、輔料質(zhì)量控制
該部分應(yīng)列出主要原材料質(zhì)量控制要點，關(guān)鍵原材料，如抗原，抗體等應(yīng)注明來源，性質(zhì)，質(zhì)控指標(biāo)等，生物原料應(yīng)保證其生物安全。
（一）主要生物原料
與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量zui密切相關(guān)的生物原料包括各種活性抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被微孔反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)標(biāo)記物及中和反應(yīng)用抗原、或進(jìn)行校準(zhǔn)品配置等。一般按工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量要求。原料供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料的供應(yīng)商有變更，必須進(jìn)行原料驗證，并進(jìn)行申報。常規(guī)檢驗項目一般包括：
1、外觀
肉眼觀察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物，不得渾濁，不得有搖不散的沉淀；或者為凍干品。白色粉末，不含有其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。
2、純度和分子量
主要通過SDS-PAGE電泳進(jìn)行檢測，根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般情況下，每個電泳道加樣量為2?10 ?g，同時用已知分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)作參照，采用適宜的電泳電流、電壓和電泳時間；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)R-250染色。應(yīng)該顯示為正確的條帶，純度應(yīng)達(dá)到要求。
3、蛋白濃度
蛋白濃度可用生理鹽水稀釋，用紫外分光光度計在波長280nm處檢測出吸光值，計算出蛋白濃度,或采用其它適宜方法進(jìn)行測定,應(yīng)符合相應(yīng)規(guī)定的要求。
4、效價
效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果通過倍比稀釋法測定。效價應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。
5、功能性實驗
功能性實驗是指該生物原料用于相應(yīng)的試劑盒試劑實際生產(chǎn)中的情況，一般考查該原料使用后的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較和以前批號原料的相關(guān)性。
（二）生物輔料
生物輔料指的是在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料、主要包括牛血清、羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》上規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。
1、牛血清或羊血清
外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體,無溶血或異物。
無菌試驗：將血清直接放到37℃培養(yǎng)7天，放在明亮處觀察, 不得出現(xiàn)渾濁。
總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，標(biāo)準(zhǔn)為不小于32mg/ml。
球蛋白含量：取待測血清1ml，加入0.85％的NaCl溶液。加入飽和硫酸銨1ml，置4℃，2小時，8000rpm離心10分鐘，棄上清。沉淀溶于0.85％NaC1溶液至1ml，用Lowry方法測定蛋白含量，不能大于2mg/ml。
功能性實驗：10％血清稀釋液作為樣本進(jìn)行測定，不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。
2、牛血清白蛋白
外觀：應(yīng)為淺黃色凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其他雜質(zhì)顆粒。
溶解性：將牛血清白蛋白配成10％溶液，溶解時間應(yīng)不大于15分鐘。1％水溶液的pH值：6.5?7.1；1％水溶液OD403值：＜0.15。
總蛋白含量：用雙縮脈方法來測定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。
硫酸銨含量：納氏試劑法測定，通過用標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨曲線可查出硫酸銨含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≤0.1%。
尿素含量：采用二乙酸一肟法測定，通過用標(biāo)準(zhǔn)尿素曲線可查出尿素含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≤0.1%。
總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法。其標(biāo)準(zhǔn)為95％以上。
BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90％。
3、酪蛋白
酸度：應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。
功能性實驗：10％酪蛋白作為樣本進(jìn)行測定，不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。
4、標(biāo)記用酶
根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢定方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢定，RZ值要大于2.8。
（三）化學(xué)原材料
參照《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》分析純級別檢定。主要的檢測指標(biāo)包括一些基本的一般鹽類檢測、溶液PH值、重金屬檢測、溶解情況的檢測、干燥失重的檢測。熾灼殘渣等。
1、無機(jī)類：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。
有機(jī)類：主要包括有吐溫20、三羥基氨基甲烷等。
2、特殊化學(xué)原料：Eu-DTTA，魯米諾等。
Eu-DTTA純度分析與鑒定：要求Eu-DTTA各功能團(tuán)符合分子結(jié)構(gòu)，純度在96%以上。
（四）其他原輔料
1、微孔板條
外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量應(yīng)無劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與微孔反應(yīng)條塑料框架應(yīng)配合合適。
材質(zhì)：微孔反應(yīng)板條每孔加200µL增強(qiáng)液，用時間分辨熒光分析儀檢測其熒光值，平均本底熒光值≤1500。吸附能力和精
密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測熒光值，計算其CV值、批內(nèi)差標(biāo)準(zhǔn)CV≤5％,批間差CV≤10％。
2、其他
粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等都應(yīng)建立適合本企業(yè)的相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
三、試劑盒各組分的生產(chǎn)
該部分重點列出各組分生產(chǎn)中應(yīng)寫進(jìn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（規(guī)程）的工藝要點及質(zhì)量控制要點，應(yīng)包括產(chǎn)品的主要生產(chǎn)工藝，在以后檢查企業(yè)時可依照該部分內(nèi)容考察其是否按照所報工藝生產(chǎn)。
診斷試劑盒主要組分的生產(chǎn)包括包被反應(yīng)板、標(biāo)記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢定和成品檢定兩個質(zhì)控過程來完成。
（一）固相載體的制備（因不同產(chǎn)品使用的包被載體有很大區(qū)別，在此以標(biāo)準(zhǔn)96孔微孔反應(yīng)板為例進(jìn)行描述）
1、包被板的準(zhǔn)備
準(zhǔn)備經(jīng)檢驗合格的包被板，記錄批號、數(shù)目、狀態(tài)標(biāo)識。
質(zhì)控項目：尺寸，外觀，包裝。
2、包被液的配制
配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原到工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)使用。
質(zhì)控項目：包被緩沖液配方，pH，包被物成份。
3、包被板的包被
包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數(shù)量。
質(zhì)控項目：包被體積，溫度，時間，過程監(jiān)控。
4、洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板）
按配方配制洗板工作液。
質(zhì)控項目：洗板工作液配方，pH。
5、封閉液的配制
按配方配制封閉液。
質(zhì)控項目：封閉液配方，pH。
6、洗板和封閉
包被完成后，抽去孔內(nèi)包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板），加入封閉液。
質(zhì)控項目：封閉體積，溫度，時間，過程監(jiān)控。
質(zhì)檢項目：封閉前檢驗包被均一性。
7、抽干
封閉后的反應(yīng)板，抽干孔內(nèi)液體。
質(zhì)控項目：過程監(jiān)控。
8、干燥
反應(yīng)板應(yīng)按工藝的要求進(jìn)行干燥。
質(zhì)控項目：溫度，濕度，時間，過程監(jiān)控等。
9、密封包裝
將干燥后的反應(yīng)板用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。
質(zhì)控項目：密封性能，標(biāo)示及效期等。
10、反應(yīng)板（半成品）檢驗
對裝袋密封后的反應(yīng)板進(jìn)行抽樣檢驗，外觀、板內(nèi)變異、板間變異。
（二）滴配過程
1、酶結(jié)合物的制備（根據(jù)各產(chǎn)品實際情況，該步驟可不進(jìn)行）
采用常規(guī)過碘酸鈉——乙二醇法將相關(guān)的抗體（或抗原）標(biāo)記辣根過氧化物酶（或其他酶），酶標(biāo)記后的抗體（或抗原）應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑保存于低溫。
質(zhì)控項目：標(biāo)記方法，過程控制。
2、酶結(jié)合物的鑒定
（1）功能性實驗
將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋后，用于產(chǎn)品的滴配，其結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
（2） 穩(wěn)定性
將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋，進(jìn)行2-8℃，及熱穩(wěn)定性實驗，滴配結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
3、酶結(jié)合物稀釋液
按酶結(jié)合物稀釋液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于規(guī)定時間內(nèi)使用。
質(zhì)控項目：酶結(jié)合物稀釋液配方，pH。
4、酶結(jié)合物工作濃度的滴配
取酶結(jié)合物，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應(yīng)板進(jìn)行滴配。測定系列標(biāo)準(zhǔn)品及相應(yīng)的質(zhì)控品，確定使體系達(dá)到*的酶結(jié)合物工作濃度。
5、酶結(jié)合物工作液配制
將所需量酶結(jié)合物和酶結(jié)合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。
質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，用配套的反應(yīng)板進(jìn)行檢驗，外觀、靈敏度、質(zhì)控品測定值、定量產(chǎn)品應(yīng)作校準(zhǔn)品線性檢測。
6、酶結(jié)合物工作液的分裝
按工藝要求分裝酶結(jié)合物工作液。
質(zhì)控項目：分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。
7、酶結(jié)合物工作液（半成品）檢驗
對分裝后的酶結(jié)合物工作液進(jìn)行抽樣檢驗，外觀、分裝量、靈敏度、校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線線性、質(zhì)控品測定值。
（三）校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品的制備
1、稀釋液
按稀釋液的配方配制，存放在2?8℃或-20℃保存，并于有效期內(nèi)使用。
質(zhì)控項目：稀釋液配方，pH。
2、校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品的配制
校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品的配制要具有溯源性，可參照國家標(biāo)準(zhǔn)品、WHO標(biāo)準(zhǔn)品或其他級別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行配制。
質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，準(zhǔn)確性、劑量——反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。
3、校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品的分裝
按工藝要求分裝校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品。
質(zhì)控項目：分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量。
4、校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品（半成品）檢驗
對分裝后的校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品進(jìn)行抽樣檢驗，外觀、分裝量、準(zhǔn)確性、劑量——反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。
（四） 化學(xué)發(fā)光底物的制備
1、底物緩沖液
按底物緩沖液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于有效期內(nèi)使用。
質(zhì)控項目：底物緩沖液配方，pH。
2、化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的配制
分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應(yīng)的氧化劑和發(fā)光劑
質(zhì)控項目：氧化劑和發(fā)光劑配方。
質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，本底、發(fā)光強(qiáng)度。
3、化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的分裝
按工藝要求分裝化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）。
質(zhì)控項目：分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。
4、化學(xué)發(fā)光底物（半成品）檢驗
對分裝后的化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行抽樣檢驗，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發(fā)光強(qiáng)度。
（五）銪標(biāo)記物的制備
針對不同的標(biāo)記生物原料，確定不同的標(biāo)記制備工藝，包括銪-DTTA與標(biāo)記生物原料的比例，標(biāo)記溫度和標(biāo)記時間、標(biāo)記得率的計算標(biāo)準(zhǔn)等。在實際操作過程中要求嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作
（六）凍干
各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應(yīng)該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固體，具有一定的形狀，復(fù)溶*、迅速，呈澄清透明液體。
（七）分裝、燈檢和貼簽
分裝量用減重稱量法進(jìn)行測量，把質(zhì)量換算成體積后進(jìn)行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質(zhì)等。
（八）包裝
根據(jù)試劑盒包裝SOP要求及說明書的要求，以流水線操作形式進(jìn)行包裝。包裝時應(yīng)嚴(yán)格檢查品名、批號、裝量，認(rèn)真核對各物料數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。
四、質(zhì)量控制
該部分應(yīng)寫出半成品及成品質(zhì)量控制要點，重點寫出控制項目，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，檢定方法等。試劑的質(zhì)量控制一般應(yīng)包括陽性樣品符合率，陰性樣品符合率，靈敏度（zui低檢出量），特異性，定量范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等。應(yīng)特別注意，如有國家參考品則試劑的成品檢定應(yīng)采用國家參考品，半成品檢定可采用國家參考品或按照國家參考品標(biāo)定的企業(yè)參考品，參考品基質(zhì)應(yīng)與所檢測樣品一致。（如檢測人血應(yīng)用人血作參考品等）。
（一）半成品質(zhì)量控制
1、半成品抽樣
檢驗人員按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作好標(biāo)識。
2、質(zhì)控品的要求
用于半成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括陽性樣品符合率，陰性樣品符合率，靈敏度（zui低檢出量），特異性，定量范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等指標(biāo)，如具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)標(biāo)化質(zhì)控品進(jìn)行檢定。如無國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品可采用企業(yè)質(zhì)控品。企業(yè)參考品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不得低于國內(nèi)已批準(zhǔn)同類產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
3、半成品檢定
根據(jù)各個試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢定，對所抽樣的半成品做準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性、精密性、相關(guān)性、批內(nèi)差等試劑盒性能方面的檢測，并進(jìn)行穩(wěn)定性試驗，其準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性、精密性、相關(guān)性、批內(nèi)差等的檢測應(yīng)達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（1）物理性能：液體組分應(yīng)澄清，無沉淀或絮狀物；凍干組分呈疏松體或晶狀，加水后應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)*溶解；所有組分應(yīng)無包裝破損。
（2）試劑盒校準(zhǔn)品準(zhǔn)確性：試劑盒的校準(zhǔn)品與相應(yīng)濃度的國家標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品同時進(jìn)行分析測定，要求兩條曲線不明顯偏離平行；以國家標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品為對照品，試劑盒校準(zhǔn)品的實測效價與標(biāo)示效價的比應(yīng)在0.900?1.100之間?；蛴闷渌m宜方法測定。
（3）劑量——反應(yīng)曲線的線性：劑量-反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)（r）
值應(yīng)不低于0.9900。
（4）精密度：分析內(nèi)，分析間精密度應(yīng)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（5）特異性:應(yīng)達(dá)要求。
（6）靈敏度:應(yīng)達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（7）穩(wěn)定性：試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時作37℃熱穩(wěn)定性試驗，推算出2?8℃存放及37℃熱穩(wěn)定性的關(guān)系。37℃放置規(guī)定時間，測定結(jié)果應(yīng)符合上述各項要求。
（二）成品質(zhì)量控制
1、成品抽樣
檢驗人員按批號抽取規(guī)定數(shù)量的成品，作好標(biāo)識。用于生產(chǎn)許可審批的每批生產(chǎn)數(shù)量不得低于10000人份。
2、成品檢定
根據(jù)各個試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行成品的檢定，對所抽樣的成品做準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性、精密性、相關(guān)性、批內(nèi)差等試劑盒性能方面的檢測，并進(jìn)行穩(wěn)定性試驗，準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性、精密性、相關(guān)性、批內(nèi)差等的檢測應(yīng)達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（1）物理性能：液體組分應(yīng)澄清，無沉淀或絮狀物；凍干組分呈疏松體或晶狀，加水后應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)*溶解；所有組分應(yīng)無包裝破損。
（2）試劑盒校準(zhǔn)品準(zhǔn)確性：試劑盒的校準(zhǔn)品與相應(yīng)濃度的國家標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品同時進(jìn)行分析測定，要求兩條曲線不明顯偏離平行；以國家標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品為對照品，試劑盒校準(zhǔn)品的實測效價與標(biāo)示效價的比應(yīng)在0.900?1.100之間?；蛴闷渌m宜方法測定。
（3）劑量——反應(yīng)曲線的線性：劑量-反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)（r）值應(yīng)不低于0.9900。
（4）精密度：分析內(nèi)，分析間精密度應(yīng)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（5）特異性:應(yīng)達(dá)要求。
（6）靈敏度:應(yīng)達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（7）穩(wěn)定性：37℃放置規(guī)定時間，測定結(jié)果應(yīng)符合上述各項要求。
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