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公眾號(hào)：chem17
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使用 STELLARIS 共聚焦平臺(tái)進(jìn)行 TauSense 和 FLIM 分析
共聚焦顯微鏡技術(shù)依賴于熒光探針的有效激發(fā)以及由熒光過程所發(fā)射的光子的高效收集。熒光特性之一是其發(fā)射波長（即熒光團(tuán)的光譜特征）。另一個(gè)更為強(qiáng)大但尚未充分探索的特性是熒光壽命（熒光團(tuán)在激發(fā)態(tài)的持續(xù)時(shí)間）?；跓晒鈮勖男畔⒃黾恿斯簿劢箤?shí)驗(yàn)的一個(gè)額外維度，能夠揭示熒光團(tuán)微環(huán)境的信息，并允許對(duì)光譜特性相重疊的物種進(jìn)行多重分析。
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利用STELLARIS共聚焦平臺(tái)進(jìn)行FLIM成像
本圖片庫展示了 TauSense 和熒光壽命成像（FLIM）在 STELLARIS 共聚焦平臺(tái)上的應(yīng)用。
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用四種紅色熒光蛋白標(biāo)記的秀麗隱桿線蟲神經(jīng)元的三維共聚焦圖像
使用STELLARIS 8 FALCON以單一激發(fā)線和單一探測(cè)器獲得了一幅標(biāo)記有四種紅色熒光蛋白的秀麗隱桿線蟲神經(jīng)元的三維共聚焦圖像。這四種不同的信號(hào)是通過相位分離技術(shù)獲得的。采用單一激光線和探測(cè)器不僅提升了實(shí)時(shí)成像的速度，也降低了所需的激光劑量。灰色表示僅強(qiáng)度信息，彩色表示合并后的相位分離信號(hào)。標(biāo)尺：20微米。通過FLIM在單一探測(cè)器上跟蹤4種不同的神經(jīng)元類型。
用四種紅色熒光蛋白標(biāo)記的秀麗隱桿線蟲神經(jīng)元的三維共聚焦圖像
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小鼠胃干細(xì)胞衍生類器官的轉(zhuǎn)錄活動(dòng)
通過Hoechst 標(biāo)記細(xì)胞核。熒光壽命的差異反映了DNA壓縮程度的不同。較長的熒光壽命（紅色）對(duì)應(yīng)于具有更多開放閱讀框架和活躍DNA轉(zhuǎn)錄的細(xì)胞，如干細(xì)胞。該視頻采用多光子（DIVE）和熒光壽命（FALCON）技術(shù)進(jìn)行獲取。
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內(nèi)吞途徑和線粒體動(dòng)力學(xué)
用 MitoView Green 標(biāo)記的線粒體。用 CellBright NIR750 標(biāo)記的膜泡。使用 TauSeparation，根據(jù)與囊泡內(nèi)吞成熟相關(guān)的 pH 值成熟步驟進(jìn)行壽命成分分離，揭示不同的內(nèi)吞步驟。
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使用 TauSeparation 在活細(xì)胞中進(jìn)行基于生命周期的多重分析
用 MitoTracker Green、NucRed 和 SiR Tubulin 染色表達(dá) mNeonGreen-LifeAct 的 NE-115 活細(xì)胞。使用 2 個(gè)檢測(cè)器采集信號(hào)，每個(gè)檢測(cè)器檢測(cè)兩種熒光團(tuán)。強(qiáng)度圖像顯示為黃色和灰色。每個(gè)檢測(cè)器的信號(hào)是不同的
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利用多光子和熒光壽命成像技術(shù)探索葉綠體活性
多光子透射圖像展示了葉片結(jié)構(gòu)，葉綠體的內(nèi)源性熒光顯示為綠色。接著，熒光壽命成像的相位分析指紋將這些內(nèi)源性熒光根據(jù)每個(gè)葉綠體的氧化潛力轉(zhuǎn)換為不同顏色。
標(biāo)記有MitoTracker Green的表達(dá)LifeAct-GFP的哺乳動(dòng)物細(xì)胞（由ibidi GmbH生產(chǎn)）。采集由一個(gè)檢測(cè)器完成，分離由TauSeparation執(zhí)行。
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擬南芥的根-子葉交界處
大自然是多維的。為了真正理解其復(fù)雜性，我們需要從多個(gè)維度進(jìn)行觀察。這幅擬南芥根交界處的詳細(xì)多彩圖像僅需一次點(diǎn)擊和一個(gè)探測(cè)器即可獲取。若使用傳統(tǒng)共聚焦顯微技術(shù)，則圖像將呈現(xiàn)為黑白。然而通過 STELLARIS，我們所見的一切都被熒光壽命信息這一額外維度所轉(zhuǎn)變。不僅肌動(dòng)蛋白豐富的根系結(jié)構(gòu)得到了清晰展示，而且其與細(xì)胞壁和葉綠體之間的關(guān)系——這些結(jié)構(gòu)僅憑強(qiáng)度數(shù)據(jù)難以或無法區(qū)分——也得以明確。這不僅是大自然之美的縮影，更是一幅內(nèi)容豐富的圖像，推進(jìn)了我們對(duì)植物生物學(xué)的理解。
擬南芥根-子葉交界處：肌動(dòng)蛋白（Lifeact-Venus, Era 等人，植物細(xì)胞生理學(xué)，2009），葉綠體（內(nèi)源熒光）和細(xì)胞壁（碘化丙啶）。使用基于熒光壽命的信息，肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)、細(xì)胞壁和葉綠體的復(fù)雜細(xì)節(jié)清晰可見。圖像由 TauContrast 采集。樣品由海德堡大學(xué)植物科學(xué)中心的 Melanie Krebs 博士提供。
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