在多重熒光免疫組化(mIHC)實驗中，選擇正確的一抗至關(guān)重要，但實驗中一些常被忽視的小步驟，如抗體稀釋液的選擇，實際上對實驗成敗起著決定性作用。本文將探討如何通過選擇合適的抗體稀釋液來優(yōu)化mIHC結(jié)果。

抗體稀釋液的重要性

抗體稀釋液不僅影響抗體與靶標的特異性相互作用，還影響抗體的穩(wěn)定性。常用的稀釋液包括PBST、TBST、PBS和TBS等。了解它們的區(qū)別對于精準選擇至關(guān)重要。

緩沖液成分對比

PBS與TBS的區(qū)別

1）PBS：基于磷酸鹽的緩沖體系，pH穩(wěn)定性好，但可能與重金屬離子形成沉淀，影響部分生化反應。

2）TBS：基于Tris-base的緩沖體系，對生化反應的干擾小，但pH易受環(huán)境和稀釋倍數(shù)影響。

Tween-20在mIHC中的作用

Tween-20是一種非離子型表面活性劑，能增加抗體與組織的接觸面積，提高抗體的復性抗原能力，從而增強特異性結(jié)合。

抗體稀釋液的選擇

1）PBS：適用于大多數(shù)實驗場景，包括洗滌和培養(yǎng)。

2）TBS：對抗體的干擾小，適合作為抗體稀釋液。

3）TBST：含有Tween-20，適合作為mIHC實驗中的抗體稀釋液。

封閉試劑的作用

封閉試劑，如與二抗同一來源的封閉血清或BSA，可以減少非特異性結(jié)合，提高抗體的特異性。如愛必信的多色試劑盒的二抗種屬來源就是山羊，那么就可以用愛必信的山羊血清（貨號：abs933）作為封閉劑。

結(jié)論

選擇合適的抗體稀釋液對于獲得wan美的mIHC結(jié)果至關(guān)重要。如果您的mIHC結(jié)果不盡如人意，建議嘗試更換抗體稀釋液以優(yōu)化實驗結(jié)果。

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