人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體ELISA試劑盒對轉(zhuǎn)鐵蛋白的測定方法

來源：深圳市科潤達生物工程有限公司 2024年08月06日 14:17

人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TransferrinReceptor，TfR）ELISA試劑盒用于測定樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的含量，通常用于血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液等樣品類型。下面是一般的操作步驟和測定方法：

1.準(zhǔn)備試劑和樣品

標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品，制備一系列不同濃度的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣品：準(zhǔn)備待測樣品，如血清、血漿等，根據(jù)需要進行稀釋處理，以確保在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)能夠正確測量。

2.實驗操作步驟

包被板：將微孔板的每個孔位用試劑盒提供的抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體（captureantibody）包被過夜（通常在4°C下）。

洗滌：使用洗滌緩沖液反復(fù)洗滌板子，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。

添加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品：

加入稀釋后的樣品和各個標(biāo)準(zhǔn)品到板中的不同孔位。

并列設(shè)置一個孔用作背景對照，只加入試劑盒提供的稀釋緩沖液。

孵育：在室溫下或者適當(dāng)溫度條件下孵育板子，使得轉(zhuǎn)鐵蛋白受體與抗體結(jié)合。

洗滌：將板子洗滌，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。

添加檢測抗體：加入另一種標(biāo)記的抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體（detectionantibody），使其與板上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合。

再次孵育和洗滌：讓檢測抗體與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合，然后再次用洗滌緩沖液洗滌板子。

加入底物：加入底物溶液，使其與檢測抗體結(jié)合的復(fù)合物發(fā)生染色反應(yīng)。

停止反應(yīng)：加入停止溶液（通常為酸性溶液），停止染色反應(yīng)。

3.測量和數(shù)據(jù)分析

使用ELISA閱讀器測量每個孔位的吸光度（OD值）。

利用標(biāo)準(zhǔn)曲線上的各個標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并據(jù)此計算樣品中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的濃度。

通過軟件或手動計算，將各個樣品的OD值轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體濃度。

注意事項

標(biāo)準(zhǔn)曲線：確保標(biāo)準(zhǔn)曲線的各個點位都在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，并且有合適的線性關(guān)系。

重復(fù)性：重復(fù)進行實驗以驗證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

控制：始終包括背景對照和質(zhì)量控制，確保試劑盒的性能和操作的準(zhǔn)確性。

通過以上步驟，人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體ELISA試劑盒可以可靠地用于測定樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的含量，這對于研究細胞表面受體的表達和其在生理和病理過程中的作用具有重要意義。

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