BCA蛋白質定量試劑盒實驗原理：

堿性條件下，蛋白質分子中的肽鍵結構能與Cu2+結合生成紫色絡合物，同時將Cu2+還原為Cu+。BCA試劑可靈敏特異的與Cu+結合，形成穩(wěn)定的有顏色的絡合物，562nm處有zui高的吸收值，可在540-595nm測定其吸收值，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。

BCA蛋白質定量試劑盒簡介：

對不同種類的蛋白質檢測的變異系數(shù)非常小，快速靈敏，穩(wěn)定可靠，測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中化學物質的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。而且在20-2000μg / mL濃度范圍內(nèi)有較好的線性關系。

BCA蛋白質定量試劑盒使用說明：

1. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫下24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2. *溶解蛋白標準品，取C液10微升稀釋至100微升，使終濃度為0.5mg/mL。原則上，蛋白樣品在什么溶液中，標準品應用什么溶液稀釋。但我們強烈建議使用三蒸水稀釋標準品及樣品。

3. 標準品的稀釋：標準曲線的濃度范圍應在20-2000μg / mL之間。建議使用倍比稀釋法；建議取4~6個不同的濃度做標準曲線；建議每個濃度做2~3個復孔。

4. 蛋白樣品的稀釋：將待測蛋白樣品稀釋到標準曲線所能檢測的范圍內(nèi)。在eppendorf管中對待測蛋白進行稀釋，混勻?？捎萌芙獾鞍椎囊后w進行稀釋，但我們建議使用三蒸水稀釋標準品。

5. 在96孔板各孔中加入200μL BCA工作液，再在每孔中分別加入已稀釋好的標準品和蛋白樣品各20μL，建議標準品做2~3個復孔。37℃放置30分鐘。

6. 測定A562nm處的吸光度值，540-595nm之間的波長也可接受。根據(jù)標準曲線計算出蛋白濃度。