工欲善其事必先利其器,生物制藥從前期藥物靶點確認(rèn),高通量篩選,藥物優(yōu)化,活性功能分析,工藝開發(fā),直至質(zhì)量控制都離不開酶標(biāo)儀這一檢測工具。一款優(yōu)秀的酶標(biāo)儀,在靈敏度,穩(wěn)定性,功能多樣性幾個維度如何平衡和把握呢?
酶標(biāo)儀最常規(guī)的功能包含光吸收,熒光和化學(xué)發(fā)光,這三種應(yīng)用能夠滿足比較基礎(chǔ)的檢測需求。但它們在原理上有著迥異的差別:光吸收是基于光通過物質(zhì)時被吸收的定律進(jìn)行定性和定量分析;熒光是熒光分子中處于激發(fā)態(tài)的原子核外電子由高能級回到低能級所產(chǎn)生的輻射;化學(xué)發(fā)光的檢測信號是酶促反應(yīng)過程中釋放的光子,不需要激發(fā)光。因此,若想獲取比較好的檢測結(jié)果,三種功能模塊的檢測器需要獨立才是,尤其是化學(xué)發(fā)光,需要獨立于熒光之外的超敏感檢測模式,放大檢測光子信號、減少空間串?dāng)_,才能在實驗中得到更好的檢測窗口。
質(zhì)的飛躍——EnSight超敏化學(xué)發(fā)光
EnSight這款多模式檢測儀最初的設(shè)計理念就是模塊化的光路設(shè)計,不同且獨立的檢測器滿足不同應(yīng)用需求。采用專用超敏感化學(xué)發(fā)光檢測器以及免光纖的光路,在檢測時更靠近檢測樣品,有效避免相鄰樣本的交叉干擾,也更易于捕捉微弱信號,有效區(qū)分背景干擾和樣品信號,相對普通化學(xué)發(fā)光,靈敏度提升10倍,孔間串?dāng)_低0.05%,確保實驗結(jié)果的可靠和準(zhǔn)確。
EnSight超敏化學(xué)發(fā)光檢測光路以及與一般化學(xué)發(fā)光的比較
2020年,中國食品藥品檢定研究院(簡稱中檢院)王佑春團(tuán)隊在EmergingMicrobes &Infections上發(fā)表了重要論文,本文作者開發(fā)了SARS-CoV-2抗病毒檢測的PBNA(pseudovirus-based neutralization assays)評價方法。首先作者構(gòu)建并滴定SARS-CoV-2假病毒;接著對SARS-CoV-2 PBNA體系進(jìn)行了優(yōu)化;最終將此PBNA體系可作為疫苗對抑制SARS-CoV-2侵入效果和靶向病毒入侵治療方案的評價方法。
作者全程借助EnSight和Britelite底物進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測:
SARS-CoV-2假病毒構(gòu)建和滴度檢測
SARS-CoV-2中和反應(yīng)檢測方法的建立和驗證
基于整個檢測系統(tǒng)的高靈敏度和穩(wěn)定性,該方法作為標(biāo)準(zhǔn)SOP下發(fā)各省疾控,同時提供給治療藥物開發(fā)機(jī)構(gòu),以評估候選疫苗或藥物的療效。
SARS-CoV-2 PBNA驗證和工作流程
除了基礎(chǔ)的三功能,要實現(xiàn)更多的檢測應(yīng)用,尤其是藥物研發(fā)階段,具有多功能或可擴(kuò)展性的酶標(biāo)儀是更好的選擇。
EnSight除具有基本功能高精度四光柵(光吸收、熒光)模塊和超靈敏獨立化學(xué)發(fā)光檢測以外,還可擴(kuò)展超靈敏度Alpha檢測功能以及高靈敏時間分辨熒光&高兼容性TR-FRET。
Alpha,讓最費時耗力的ELISA得以解放
說起ELISA,可謂是免疫學(xué)中的經(jīng)典實驗,但是做過的小伙伴都知道,過程“耗時耗力”,加樣,甩板子,洗滌,反復(fù)循環(huán),一次實驗耗費大半天時間。那么,到底怎樣才能實現(xiàn)靈敏度又高,流程又短,省時省力的目標(biāo)蛋白檢測呢?
只需混合無需洗滌的ELISA——Alpha提供解決方案。和ELISA相比,Alpha是為均相檢測,操作十分簡便。可省去費時費力的清洗步驟,無論是總的實驗操作時間,還是試劑準(zhǔn)備時間都被大大縮短。
Alpha檢測須配置高強(qiáng)度的激光光源,以激發(fā)出供體微珠上足量的單體氧分子。EnSight超靈敏HTS Alpha模塊在配置激光光源和超靈敏PMT的基礎(chǔ)上,又對光源和PMT進(jìn)行了優(yōu)化,因此其信噪比更高、檢測速度更快,得到低背景、高靈敏度的信號。再者,易于實現(xiàn)自動化分液操作,非常適合高通量篩選。
技多不壓身——時間分辨熒光(TRF)
稀土元素在受到熒光激發(fā)時,發(fā)生熒光衰減的周期通常是很長,能達(dá)到1-2ms,可以滿足測量要求,因此而產(chǎn)生了時間分辨熒光分析法,即使用長效熒光標(biāo)記物,在關(guān)閉激發(fā)光后再測定熒光強(qiáng)度的分析方法。TRF光信號比普通熒光信號較弱,EnSight采用優(yōu)化的濾光片及專用二向色鏡光路,以盡量保證激發(fā)光強(qiáng)度、光透過率及雜信號干擾,以達(dá)到更好的檢測靈敏度和信噪比。
EnSight還是一臺細(xì)胞成像分析儀
酶標(biāo)儀一般是通過讀取光強(qiáng)度值這一單一維度來評估樣品信息,但細(xì)胞類檢測對數(shù)據(jù)的更高要求,如細(xì)胞數(shù)量、生長融合度、細(xì)胞形態(tài)和增殖、凋亡水平、病毒空斑實驗等。EnSight十八般武藝,樣樣精通。
EnSight具有高速高效細(xì)胞成像模塊,采用先進(jìn)的sCMOS相機(jī)以降低信號背景噪音,激光自動聚焦以快速成像,固態(tài)光源(LED)以進(jìn)行短時照明??梢砸来芜M(jìn)行多通道檢測,一整個384孔板整板生成單色圖像只需大約5分鐘。相比人工計數(shù)和分析,可以顯著提高實驗通量以及實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
EnSight 多模式檢測儀進(jìn)行成像和空斑計數(shù)分析
人工計數(shù)和EnSight計數(shù)的比較
如虎添翼——智能分析軟件
出色的酶標(biāo)檢測結(jié)果,離不開硬件全程保駕護(hù)航,同時更需要一個好的軍師——分析軟件。
EnSight基于工作流程的Kaleido數(shù)據(jù)采集和分析軟件方便易學(xué),其用戶界面會引導(dǎo)實驗進(jìn)行,更加輕松自如地設(shè)置和運行多技術(shù)流程。用戶可根據(jù)自己的技能水平和熟練程度設(shè)置實驗方案。預(yù)制的方案有助于更快啟動實驗,非常適合新手和日常應(yīng)用。利用該軟件的任務(wù)工具箱,可以將任務(wù)結(jié)合起來創(chuàng)建自定義方案,因此可以在更廣泛的成像應(yīng)用中快速獲取結(jié)果。
集美貌與才華與一身,EnSight多功能酶標(biāo)儀以一種方式將標(biāo)記技術(shù)與微孔板顯微成像技術(shù)整合,為您的研究提供一種真正的正交方法,使您獲得深入見解。
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