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MTF比色法測(cè)定slL-1的生物活性

來源:上海銳谷生物科技有限公司   2011年12月17日 11:29  

  四甲基偶氮唑鹽[3—(4.5-dimethylthiazol-2-Y1)-2,5-diphenyltetmzolimnbromide,MTF)在活細(xì)胞線粒體的琥珀酸脫氫酶作用下,被還原成藍(lán)黑色的MTr-甲脂,形成MTr-甲鐕的量與細(xì)胞增殖程度呈正相關(guān)。故通過測(cè)定細(xì)胞形成MTF-甲鐕量,可間接定量分析細(xì)胞的增殖情況,具體步驟如下:

    (1)用PBS溶解MTT為5mg/mL,用0.22/zm膜濾器除菌及雜質(zhì)。
    (2)加MTF至培養(yǎng)的細(xì)胞及IL-1樣品中,10uL/孔,37~C溫育4ho
    (3)于每孔加酸化異丙醇100t~L/孔,充分混勻以溶解底物。酸性條件使培養(yǎng)液中酚紅指示劑變?yōu)辄S色,以利于對(duì)MTr-甲脂轉(zhuǎn)化物的測(cè)定。
    (4)將微量測(cè)定板置室溫?cái)?shù)分鐘,保證轉(zhuǎn)變的底物結(jié)晶被溶解。
    (5)置酶標(biāo)儀,調(diào)整檢測(cè)波長(zhǎng)為570nm,參考波長(zhǎng)為630nm。測(cè)定應(yīng)在酸化異丙醇加入后1h內(nèi)完成。

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