細(xì)胞培養(yǎng)小知識(shí)，你知道嗎?

　　什么是細(xì)胞培養(yǎng)呢?

　　細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物或植物中取出細(xì)胞，然后使其在合適的人工條件下生長。這些細(xì)胞可于培養(yǎng)前直接從組織中取出來并采用酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，或者也可來自已經(jīng)建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。

　　接下來我們一起跟隨BUNSEN本生了解一些細(xì)胞培養(yǎng)中的小技巧：

　　1、冷凍管該如何解凍? 取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管爆裂。

　　2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO? 除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感的細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞)，在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附的問題。

　　3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基? 不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基， 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無法存活。

　　4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清種類? 不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。

　　5、何謂FBS,FCS,CS,HS? FBS(fetal bovine serum)和FCS(fetal calf serum)是相同的意思，兩者都是指胎牛血清，F(xiàn)CS乃錯(cuò)誤的使用字眼，請不要再使用。CS(calf serum)則是指小牛血清。HS(horseserum)則是指馬血清。

　　6、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2?或根本沒有影響? 一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

　　7、何時(shí)須更換培養(yǎng)基? 視細(xì)胞生長密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。

　　8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素? 除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。

　　9、附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用的trypsin-EDTA濃度?應(yīng)如何處理? 一般使用的trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于-20°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 的活性降低，并可減少污染的機(jī)會(huì)。

　　10、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理? 一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時(shí)，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，重復(fù)前述步驟即可。

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