光是電磁波,波長100nm~400nm稱為紫外光, 400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩,是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因為植物吸收了光中的紅色光譜。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。
檢測單位:
光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示, OD是optical delnsity(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強度成下述關(guān)系:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 為在檢測物之前的光強度,Ι為從被檢測物出來的光強度。
OD值由下述公式計算:
E=OD=C×D×E
C為檢測物的濃度
D為檢測物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測定檢測物時,我們選擇特定的波長進行檢測,稱為測量波長。
但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取一個參照波長,以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下,檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
Anthos 酶標(biāo)儀檢測值計算
儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量,轉(zhuǎn)換成二進位數(shù)字信號,最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%,沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中,檢測物的透光值均在 0%一100%之間。透光值
的計算如下:
T=(Meas—Min)/(Max—Min)
其中T為透光值, Meas為檢測的二進位數(shù)值, Min為在 0%的情況下檢測的二進位數(shù)值, Max為在100%的情況下檢測的二進位數(shù)值,舉例如下:
MaX=3600 Mn=20 Meas=30
T=(30-20)/3600-20)=0.0028
OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552
Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位
儀器會自動對酶標(biāo)孔進行中心定位,中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。在對每一個酶標(biāo)儀進行檢測時,儀器其實要進行35個點的測量,選取最中間的5個點的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。
酶標(biāo)儀的用途和其它提示
用于ELISA試劑的測定,廣泛用于各種實驗室,包括臨床實驗室。
質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進行質(zhì)量控制。
空白校正
有一些試劑盒的說陰書將空白孔設(shè)置為空氣,其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的,請按照試劑盒的說明書要求進行。
檢測結(jié)果的解釋
由于有相當(dāng)多的因素會影響檢測的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)板,檢測試劑的體積,都會造成OD值的不,因此,只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進行。
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