近年來，羊奶市場(chǎng)規(guī)模不斷上升，開發(fā)了品種繁多的羊奶產(chǎn)品，其中羊奶粉是銷量的產(chǎn)品。在原料中摻入牛乳成分是常見的方式，因?yàn)榕Ｈ槌煞窒嗨?，成本低，而且容易獲得。近年來，在羊奶及其乳制品的多次抽樣調(diào)查中發(fā)現(xiàn)摻假現(xiàn)象。摻假不僅侵犯了消費(fèi)者的利益，而且還可能引起食物過敏。因此，開發(fā)一種快速檢測(cè)羊奶粉摻假的方法十分重要。

 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)的沈興課題組聯(lián)合艾迪基因在《Foods》上發(fā)表了題為“A Rapid RPA-CRISPR/Cas12a Detection Method for Adulteration of Goat Milk Powder”的文章，影響因子5.561，本研究建立了一種快速的RPA-CRISPR/Cas12a定性檢測(cè)牛源性成分摻假羊奶粉的方法。

本研究采用CRISPR/Cas12a檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)合重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù)對(duì)羊奶粉中牛源性成分的摻假進(jìn)行定性檢測(cè)。設(shè)計(jì)篩選特異性引物和crRNA。在對(duì)RPA和Cas體系進(jìn)行優(yōu)化后，建立了RPA- crispr /Cas12a檢測(cè)方法。該檢測(cè)無需大型設(shè)備輔助，可在45分鐘內(nèi)完成牛源性成分的快速鑒定。

RPA-CRISPR/Cas12a法對(duì)?；蚪MDNA的檢出率可達(dá)10?2 ng/µL，對(duì)牛奶粉的檢出率可達(dá)1% (w/w)，可滿足現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的檢測(cè)要求。

真實(shí)樣品測(cè)試：共收集55種市售羊奶粉產(chǎn)品進(jìn)行盲測(cè)。結(jié)果顯示，27.3%的樣品中摻入了牛成分，顯示出羊奶粉市場(chǎng)摻假情況嚴(yán)重。

總結(jié)：本研究建立了一種快速的RPA-CRISPR/Cas12a定性檢測(cè)牛源性成分摻假羊奶粉的方法。該方法的檢出限能很好地滿足食品監(jiān)測(cè)的要求，同時(shí)保持了較高的特異性。通過對(duì)55種市售山羊奶粉產(chǎn)品的小范圍調(diào)查，發(fā)現(xiàn)目前山羊奶粉摻假情況嚴(yán)重。因此，本研究建立的RPA-CRISPR/Cas12a檢測(cè)方法非常適合用于羊奶中牛源性成分的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，可為打擊摻假羊奶食品造假提供可靠的技術(shù)參考。