實驗簡介
PD-1,全稱為“程序性死亡受體1”,又稱為CD279,是一種重要的免疫抑制分子。PD-1主要功能是下調(diào)免疫系統(tǒng)對人體細胞的反應、抑制T細胞炎癥活動,調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)并促進自身耐受。PD-1發(fā)揮功能可以預防自身免疫性疾病,但也會阻止免疫系統(tǒng)攻擊癌細胞,造成腫瘤進展。通過流式細胞技術檢測PD-1表達,可以反映腫瘤進展情況。多項研究顯示,PD-1在腫瘤患者的外周血CD8+T細胞表面過表達,并與患者的病理變化及臨床療效密切相關。CD8+PD-1+T 細胞在癌患者外周中的比例明顯增加,且晚期患者的CD8+PD-1+ T細胞水平高于早期癌患者,由此提示PD-1分子在癌患者外周血CD8+ T 細胞中的應答水平發(fā)生改變,并與患者疾病的進展密切相關。
實驗材料與方法
檢測方法:
樣本制備:
1. 消化酶制備單細胞懸液,并過濾;
2. 裂解紅細胞,1 mL 1X RBC裂解紅細胞,室溫10 min(根據(jù)廠家推薦);
3. 清洗:加入1 ml染色緩沖液,350g,離心5 min,棄上清;
4.可重復步驟3;
5. 染色:根據(jù)廠家推薦用量進行染色,室溫避光孵育20 min;
6. 清洗:加入1 ml染色緩沖液,350g,離心5 min,棄上清;
7.加入200-300 ul染色緩沖液,重懸后上機檢測。
實驗結(jié)果:
數(shù)據(jù)結(jié)果
圈門邏輯:
腫瘤組織中先圈出白細胞的信號CD45+(圖A),再圈總的CD3+T細胞(圖B),再分別看CD4(圖C)、CD8(圖D)、NK和NKT(圖E)在淋巴細胞中的占比,最重要的是看PD-1在淋巴的CD3+T細胞的雙陽信號(圖F)。腫瘤組織中淋巴細胞的占比會下降,特別是發(fā)展到后期,白細胞整體降低,PD-1在CD3+T中信號明顯。PD-1在CD8+T細胞中表達水平較低。
結(jié)果分析總結(jié):
腫瘤組織中,淋巴細胞亞群傾向百分比降低、分群不明顯,但是此次檢測T細胞分群基本明顯。
關于層浪生物
層浪聚焦流式細胞領域,致力于實現(xiàn)流式技術系統(tǒng)化、自動化、智能化,在臨床領域推動流式技術的常規(guī)化,在科研領域推進國產(chǎn)流式標準化。目前已推出多款流式產(chǎn)品:2激光8色流式細胞儀于2021年初成功獲得NMPA注冊證;科研型產(chǎn)品3激光14色流式細胞儀FongCyte™上市一年,儀器性能獲得客戶的高度認可;臨床型產(chǎn)品3激光14色流式細胞儀LongCyte™26種型號均獲CE認證。公司核心團隊均在流式技術領域有10余年經(jīng)驗,十年如一日專注流式技術研究,致力于研發(fā)生產(chǎn)穩(wěn)定、可靠、性能優(yōu)異的產(chǎn)品。層浪未來將陸續(xù)推出更多流式產(chǎn)品,為中國的流式技術發(fā)展盡綿薄之力,做行業(yè)中流式技術普及者,做客戶信賴的流式伙伴,為中國的臨床和科研事業(yè)助飛。
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