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超低殘留分子酶,病原檢測(cè)和生物制品質(zhì)控試劑盒開(kāi)發(fā)利器!

來(lái)源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2023年08月23日 17:26  

精品推薦 | UCF.ME超低殘留分子酶,病原檢測(cè)和生物制品質(zhì)控試劑盒開(kāi)發(fā)利器!

近年來(lái)全球感染性疾病的發(fā)病率有所上升,病原體呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化的發(fā)展趨勢(shì),半數(shù)患者存在病原體不明的困境,病原體的快速診斷面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。目前用于臨床病原體檢測(cè)的方法主要包括傳統(tǒng)培養(yǎng)法、PCR法、宏基因組測(cè)序(mNGS)、病原靶向測(cè)序(tNGS)等。新冠核酸檢測(cè)讓熒光PCR技術(shù)大放異彩,新冠之后mNGS因抗疫揚(yáng)名,一度被臨床醫(yī)生所青睞,逐步走向?qū)こ0傩占?。tNGS靶向測(cè)序技術(shù)更是異軍突起,以其對(duì)“PCR”和“NGS”兼容并蓄的優(yōu)勢(shì)和快速、精準(zhǔn)、高性價(jià)比的測(cè)序服務(wù),在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域正受到越來(lái)越多的關(guān)注和使用。

 

表1.病原體檢測(cè)方法比較

 

另一方面,生物制品已應(yīng)用到生物醫(yī)藥、生物農(nóng)業(yè)、生物能源、生物制造、生物環(huán)保等多種領(lǐng)域。隨著生物制品的市場(chǎng)占比越來(lái)越大,針對(duì)生物制品,國(guó)家和相關(guān)部門(mén)也建立起規(guī)范的質(zhì)量管理體系和標(biāo)準(zhǔn),其中宿主細(xì)胞核酸殘留問(wèn)題是備受關(guān)注的焦點(diǎn)之一。生物制品如重組蛋白藥、抗體藥、疫苗、細(xì)胞與基因藥物等產(chǎn)品是用連續(xù)傳代的菌種株/細(xì)胞株表達(dá)的,因而產(chǎn)品內(nèi)可能會(huì)殘存宿主核酸。殘留的宿主細(xì)胞核酸可能引發(fā)細(xì)胞因增殖失控變?yōu)槟[瘤細(xì)胞,也有可能存在感染性病毒基因從而加劇體內(nèi)免疫反應(yīng)。為了規(guī)避上述不良后果,從生物制品安全角度和科研需求的層面,進(jìn)行有效的核酸殘留去除與嚴(yán)格的殘留檢測(cè)非常重要,行業(yè)內(nèi)已廣泛應(yīng)用qPCR/RT-qPCR方法開(kāi)發(fā)用于檢測(cè)生物制品中的宿主核酸殘留檢測(cè)試劑盒。

 

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圖1 生物制品宿主核酸殘留質(zhì)控產(chǎn)品一覽

 

由于商業(yè)化分子酶主要采用工程菌株(如大腸桿菌等)進(jìn)行重組表達(dá),因此分子酶中會(huì)存在一定量的宿主基因組DNA殘留。加上制備環(huán)境和人源等因素影響,分子酶制品中極易存在污染DNA。

在病原體檢測(cè)過(guò)程中,污染的背景菌核酸可能會(huì)淹沒(méi)低豐度的靶標(biāo)核酸或和靶標(biāo)核酸一起被檢出,從而影響靶標(biāo)檢出靈敏度或造成假陽(yáng)性結(jié)果,給醫(yī)生診斷和用藥造成困擾。

 

在宿主核酸殘留質(zhì)控產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)過(guò)程中,分子酶中若存在殘留宿主(如人源、鼠源、大腸桿菌、酵母等)核酸,極可能造成宿主核酸殘留質(zhì)控產(chǎn)品定量不準(zhǔn)確,從而給生產(chǎn)的生物制品帶來(lái)安全隱患。

 
 
 

翌圣UCF.ME®超低殘留分子酶解決方案

 
 
為解決病原檢測(cè)背景菌及宿主核酸殘留干擾問(wèn)題,翌圣已建立完善的UCF.ME®超低殘留分子酶研發(fā)、生產(chǎn)平臺(tái),通過(guò)物料、環(huán)境、工藝、過(guò)程、質(zhì)量等多環(huán)節(jié)把控,目前已實(shí)現(xiàn)多種UCF.ME®超低殘留分子酶的規(guī)模化生產(chǎn)。(欲了解更多工藝細(xì)節(jié),請(qǐng)戳:翌圣超低殘留分子酶解決tNGS/mNGS背景菌干擾
 

 

 
 

ISO認(rèn)證超潔凈分子酶生產(chǎn)基地-UCF.ME

 
 

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圖2.翌圣UCF.ME®超潔凈分子酶生產(chǎn)基地

 

 
 

翌圣UCF.ME®超低殘留分子酶產(chǎn)品

 
 
翌圣通過(guò)ZymeEditor™酶改造平臺(tái)對(duì)qPCR/RT-qPCR、NGS建庫(kù)全套分子酶進(jìn)行改造,同時(shí)使用UCF.ME®超低殘留工藝對(duì)分子酶產(chǎn)品進(jìn)行處理,目前可規(guī)?;峁┯糜趒PCR/RT-qPCR檢測(cè),NGS建庫(kù)的全套高性能、超低宿主殘留分子酶原料,助力解決病原檢測(cè)及宿主核酸殘留質(zhì)控產(chǎn)品中的宿主及背景菌核酸干擾,提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。
 

 

表2.翌圣UCF.ME®超低殘留分子酶產(chǎn)品清單

 

 
 

部分?jǐn)?shù)據(jù)展示

 
 
以UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase為例
 
E. coli基因組DNA殘留<0.005 copies/U
 
 
對(duì)不同批次的翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)進(jìn)行E. coli基因組DNA殘留檢測(cè),結(jié)果顯示Taq DNA聚合酶宿主基因組DNA殘留遠(yuǎn)低于0.005 copies/U。

圖3.翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)E.coli基因組DNA殘留檢測(cè)

 

 
質(zhì)粒DNA殘留無(wú)檢出,優(yōu)于進(jìn)口品牌
 
 
 

使用翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)及進(jìn)口品牌A的Taq DNA聚合酶進(jìn)行質(zhì)粒DNA殘留檢測(cè),結(jié)果顯示,進(jìn)口品牌A的Taq DNA聚合酶中存在質(zhì)粒DNA殘留,翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)中無(wú)質(zhì)粒DNA檢出。

4.質(zhì)粒DNA殘留檢測(cè)結(jié)果

 

 
11種常見(jiàn)背景菌無(wú)檢出
 
 

使用翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)搭配銅綠假單胞菌,鮑曼不動(dòng)桿菌,粘質(zhì)沙雷氏菌,肺炎克雷伯菌,嗜麥芽窄食單胞菌,肺炎鏈球菌,屎腸球菌,金黃色葡萄球菌,大腸桿菌,糞腸球菌,白色念珠菌特異性引探對(duì)NTC(No Template Control)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)中無(wú)以上11種常見(jiàn)背景菌檢出。

 

圖5.11種常見(jiàn)背景菌檢測(cè)結(jié)果(限于篇幅,以銅綠假單胞菌,鮑曼不動(dòng)桿菌,粘質(zhì)沙雷氏菌,肺炎克雷伯菌為例進(jìn)行展示)

 

 
客戶測(cè)試案例展示
 
 

客戶分別使用市售常規(guī)Taq酶和翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)搭配客戶E. coli特異性引探對(duì)NTC進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示市售常規(guī)Taq酶在22次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)5次起峰,而翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)在22次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中均未起峰,結(jié)果表明翌圣UCF.ME® Taq酶(Cat#14314ES)未檢出E. coli基因組DNA。

6:E.coli 基因組DNA殘留檢測(cè)(客戶測(cè)試案例)

左圖:市售常規(guī)Taq酶;右圖:翌圣UCF.ME®Taq酶(Cat#14314ES)

 

 
 

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