一、超氧化物歧化酶(SOD)是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶,作為重要的氧自由基清除劑,能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,生成H?O?和O?。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H?O?主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。HUANG嘌呤及HUANG嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)能夠產(chǎn)生超氧陰離子(O??),O??可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,產(chǎn)物在560nm處具有特征吸收峰;SOD可清除O??,從而抑制了甲臜的形成,反應(yīng)液顏色越深,表明SOD活性愈低,反之活性越高,通過吸光值的變化即可表征SOD的活性。
二、測(cè)定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。
三、吸光值測(cè)定:將反應(yīng)液置于1mL玻璃比色皿中測(cè)定560nm處吸光值,記為A測(cè)定、A對(duì)照、A空1、A空2;計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照,ΔA空白=A空1-A空2。注:空白管1和空白管2只需測(cè)定1-2管,每個(gè)樣本均需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
四、該試劑盒含有所有測(cè)定超氧化物歧化酶活性所需的試劑和溶液,使用了基于HUANG嘌呤氧化酶和全新顯色試劑的間接分析方法。在該試劑盒中所用的顯色試劑的化學(xué)及生物化學(xué)特性保證了應(yīng)用的便利性和測(cè)試結(jié)果在寬范圍內(nèi)的線性。超氧化物歧化酶是負(fù)責(zé)消除超氧自由基(O2-)的酶,從而可保護(hù)細(xì)胞免受自由基相關(guān)的損傷。他們可催化兩個(gè)超氧化物自由基歧化為過氧化氫和氧氣。
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