蛋白質(zhì)分離純化概論:
蛋白質(zhì)分離純化是用生物工程下游技術(shù)從混合物之當(dāng)中分離純化出所需要得目的蛋白質(zhì)的方法,是當(dāng)代生物產(chǎn)業(yè)當(dāng)中的核心技術(shù)。該技術(shù)難度、成本均高;例如一個生物藥品的成本75%都花在下游蛋白質(zhì)分離純化當(dāng)中。
蛋白質(zhì)分離純化常用技術(shù):
1、沉淀
2、電泳:蛋白質(zhì)在高于或低于其等電點(diǎn)的溶液中是帶電的,在電場中能向電場的正極或負(fù)極移動。根據(jù)支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等。
3、透析:利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。
4、層析:a.離子交換層析,利用蛋白質(zhì)的兩性游離性質(zhì),在某一特定PH時,各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同,故可以通過離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析,含負(fù)電量小的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來。b.分子篩,又稱凝膠過濾。小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入孔內(nèi),滯留時間長,大分子蛋白質(zhì)不能同時入孔內(nèi)而徑直流出。
5、超速離心:既可以用來分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測定蛋白質(zhì)的分子量。不同蛋白質(zhì)其密度與形態(tài)各不相同而分開。
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