2022年是挑戰(zhàn)與機(jī)遇并存的一年。這一年，Incucyte® 碩果累累，引用文獻(xiàn)總數(shù)正式突破10000篇。其中，僅2022年CNS主刊文章就有近30篇之多（參見文末列表）。你是不是也很好奇：這些頂刊文章聚焦了哪些領(lǐng)域？它們又是如何應(yīng)用Incucyte® 的呢？為此，我們對(duì)這28篇文獻(xiàn)進(jìn)行了總結(jié)和分析，希望幫助讀者更好了解和應(yīng)用Incucyte®，以期2023，再創(chuàng)佳績(jī)！

Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)應(yīng)用非常廣泛，總覽這些文章，Incucyte® 的應(yīng)用涉及細(xì)胞殺傷、周期、內(nèi)吞、腫瘤球、趨化、克隆稀釋、報(bào)告基因等多個(gè)領(lǐng)域。從應(yīng)用方向來(lái)看，細(xì)胞殺傷仍是最熱的方向，其次是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常用的細(xì)胞活性檢測(cè)（增殖和凋亡）。從研究領(lǐng)域來(lái)看，細(xì)胞治療作為腫瘤免疫研究的焦點(diǎn)，展現(xiàn)出長(zhǎng)效治療方面的潛力，因此細(xì)胞治療仍然是Incucyte® 占比最高的領(lǐng)域，除此之外，Incucyte® 在基因調(diào)控、細(xì)胞代謝、細(xì)胞外基質(zhì)等基礎(chǔ)研究及腫瘤、衰老等疾病機(jī)理研究方面也展現(xiàn)出不俗的實(shí)力。

Incucyte® 除了應(yīng)用廣泛的特點(diǎn)，其智能化拍攝分析大大加速研發(fā)進(jìn)度，我們挑選了四篇代表性文章，看看他們具體是如何應(yīng)用Incucyte® 的。

1 一天四篇Nature，Incucyte® 助力罕見病研究

7月20日Nature同期刊登四篇文章均使用到了Incucyte® , 其中的三篇^[1-3]，同時(shí)報(bào)道了對(duì)AGS綜合征罕見病的重大研究進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)了一種ADAR1突變型AGS綜合征的ZBP1的激活引發(fā)全新發(fā)病機(jī)制，為探索ZBP1后續(xù)是如何激活下游信號(hào)通路，調(diào)控免疫應(yīng)答，促進(jìn)疾病表型的具體機(jī)制。

研究者使用細(xì)胞凋亡通路敲除原代MEF細(xì)胞，應(yīng)用Incucyte® ，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞死亡情況，驗(yàn)證ZBP1依賴性細(xì)胞凋亡通路（圖1）。Incucyte® 滿足密集時(shí)間點(diǎn)以及長(zhǎng)時(shí)間檢測(cè)的需求，一次實(shí)驗(yàn)得到大量數(shù)據(jù)，解放雙手，靈敏度高，死亡比例差距很小仍能得到確切結(jié)論。

A

B

C

圖1. A：Incucyte® 統(tǒng)計(jì)死亡細(xì)胞信號(hào)強(qiáng)度，軟件可直接導(dǎo)出數(shù)值；B，C：統(tǒng)計(jì)細(xì)胞死亡比例，Cytotox Green直接加入培養(yǎng)基中，陽(yáng)性細(xì)胞為凋亡細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞百分比（綠色熒光面積/總匯合度面積）為縱坐標(biāo)，時(shí)間點(diǎn)為橫坐標(biāo)。

陳老濕解讀：為什么一天能有4篇Nature用到Incucyte® ？因?yàn)镮ncucyte® 滿足密集時(shí)間點(diǎn)以及長(zhǎng)時(shí)間檢測(cè)的需求，一次實(shí)驗(yàn)得到大量數(shù)據(jù)，解放雙手，靈敏度高，重復(fù)性好，死亡比例差距很小仍能得到確切結(jié)論。

2 連續(xù)六輪殺傷的魔改T細(xì)胞

免疫細(xì)胞殺傷是Incucyte® 比例最高的應(yīng)用。隨著免疫治療產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，CAR-T和TCR-T等細(xì)胞療法也進(jìn)入大眾的耳中，這些細(xì)胞是由患者自身或通用型的T細(xì)胞改造而來(lái)，但T細(xì)胞殺傷能力會(huì)隨著殺傷過(guò)程逐漸衰減。

Nature的一篇文章通過(guò)改造T細(xì)胞基因，提高細(xì)胞持續(xù)殺傷能力，使效率更高。來(lái)自Gladstone–UCSF基因免疫學(xué)研究所的科研人員^[4]，通過(guò)CRISPR基因編輯方法發(fā)現(xiàn)敲除RASA2基因可以使得T細(xì)胞在多種免疫抑制劑存在的情況下依然能保持增殖，敲除后的T細(xì)胞不僅殺傷效果強(qiáng)，殺傷持續(xù)時(shí)間也比對(duì)照組強(qiáng)（圖2左），在連續(xù)六輪殺傷的過(guò)程中，殺傷作用依舊明顯（圖2右）。

圖2. 評(píng)估不同效靶比，不同CD19表達(dá)量的腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，Incucyte® 檢測(cè)和計(jì)算死細(xì)胞染料Annexin V的熒光面積，發(fā)現(xiàn)改造T細(xì)胞在靶點(diǎn)表達(dá)量非常低的情況下，仍然具有良好的殺傷效果（左），且連續(xù)六輪殺傷后殺傷作用依舊明顯（右）。

陳老濕解讀：Incucyte® 是真正的活細(xì)胞成像儀，可以監(jiān)測(cè)到幾個(gè)星期到幾個(gè)月的細(xì)胞生長(zhǎng)與形態(tài)等信息的連續(xù)變化。

3 新晉諾獎(jiǎng)得主發(fā)文發(fā)現(xiàn)病毒感染關(guān)鍵因子

瑞典當(dāng)?shù)貢r(shí)間2022年10月初，美國(guó)科學(xué)家卡羅琳·貝爾托西 (Carolyn R. Bertozzi)等人榮獲2022年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。這位諾貝爾獎(jiǎng)獲得者在9月8號(hào)，在Sciense發(fā)表研究論文^[5]，通過(guò)基因組規(guī)模的CRISPR篩選與鑒定，最終發(fā)現(xiàn)溶酶體酶運(yùn)輸因子（Lysosomal Enzyme Trafficking factor, LYSET）對(duì)依賴組織蛋白酶的病毒的感染至關(guān)重要。

為驗(yàn)證LYSET是病毒感染的關(guān)鍵因子，研究者構(gòu)建表達(dá)埃博拉病毒糖蛋白的帶有綠色熒光蛋白的水泡口炎病毒（VSV-EBOV-GP），之后應(yīng)用賽多利斯Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)獲得病毒侵染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖3）。后續(xù)研究人員構(gòu)建了VSV-SARS-COV-2，同樣應(yīng)用Incucyte® 在HAP1、Primary Fibroblasts、A549等細(xì)胞系中得到一致結(jié)論。

圖3. GFP綠色熒光表達(dá)評(píng)估病毒侵染情況，Incucyte® 連續(xù)監(jiān)測(cè)12h的病毒侵染情況，間隔1h，方便且高效，趨勢(shì)明顯，平行性好。野生型第4天開始感染，單LYSET敲除的細(xì)胞12h內(nèi)都未發(fā)生病毒感染。

陳老濕解讀：諾獎(jiǎng)獲得者是Incucyte® 的忠實(shí)粉絲，用Incucyte® 發(fā)過(guò)多篇高影響因子文章。本文有大量Incucyte® 視頻與圖片數(shù)據(jù)，不僅是趨勢(shì)分析，就是圖片清晰度也可以發(fā)Science!

4 空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)助力黑色素瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移機(jī)制

黑色素瘤是一種高度惡性腫瘤，具有高度異質(zhì)性和可塑性。來(lái)自比利時(shí)魯汶VIB癌癥生物學(xué)中心的研究人員結(jié)合多種測(cè)序技術(shù)，闡明促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素^[6]。作者利用空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)，證實(shí)黑色素瘤細(xì)胞新亞群pre-EMT NC莖樣群的存在，為證實(shí)此亞群對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的作用。體外實(shí)驗(yàn)中，作者利用腫瘤球模型，且與內(nèi)皮細(xì)胞（EC）共培養(yǎng)，使用Incucyte® 實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤球的生長(zhǎng)狀況，驗(yàn)證了內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)黑色素瘤的生長(zhǎng)的結(jié)論。對(duì)于腫瘤球或類器官等體外3D實(shí)驗(yàn)，Incucyte® 自動(dòng)對(duì)焦，拍攝多層圖片疊加生成單張清晰圖片，解決了3D樣品內(nèi)部對(duì)焦不清的問(wèn)題以及類器官長(zhǎng)時(shí)程培養(yǎng)監(jiān)測(cè)繁瑣的難題。

陳老濕解讀：Incucyte® 的3D拍攝全自動(dòng)化，不用手動(dòng)調(diào)焦，您只需要放入培養(yǎng)板，后面的事情就交給Incucyte® 吧！

參考文獻(xiàn)及2022 Incucyte® CNS文獻(xiàn)一覽表

1.ADAR1 averts fatal type I interferon induction by ZBP1.nature

2.ADAR1 mutation causes ZBP1-dependent immunopathology.nature

3.ADAR1 prevents autoinflammation by suppressing spontaneous ZBP1 activation.nature

4.RASA2 ablation in T cells boosts antigen sensitivity and long-term function.nature

5.The human disease gene LYSET is essential for lysosomal enzyme transport and viral infection.

6.A cellular hierarchy in melanoma uncouples growth and metastasis.nature

7.Magnesium sensing via LFA-1 regulates CD8+ T cell effector function.cell

8.Modular design of synthetic receptors for programmed gene regulation in cell therapies.CELL

9.Enhanced safety and efficacy of protease-regulated CAR-T cell receptors.CELL

10.Reciprocal cell-ECM dynamics generate supracellular fluidity underlying spontaneous follicle patterning.cell

11.Cholesterol and matrisome pathways dysregulated in astrocytes and microglia.cell

12.Tissue-resident memory and circulating T cells are early responders to pre-surgical cancer immunotherapy

13.Sublethal cytochrome c release generates drugtolerant persister cells.cell

14.Targeting SWI/SNF ATPases in enhancer-addicted prostate cancer.Nature

15.Effective drug combinations in breast, colon and pancreatic cancer cells.nature

16.Altered TMPRSS2 usage by SARS-CoV-2 Omicron impacts infectivity and fusogenicity.nature

17.A genome-scale screen for synthetic drivers of T cell proliferation.nature

18.CAR T cell killing requires the IFNγR pathway in solid but not liquid tumours.nature

19.Generation of 3D lacrimal gland organoids from human pluripotent stem cells.nature

20.CCNE1 amplification is synthetic lethal with PKMYT1 kinase inhibition.nature

21.Young CSF restores oligodendrogenesis and memory in aged mice via Fgf17.nature

22.Targeting SLC7A11 improves efferocytosis by dendritic cells and wound healing in diabetes.nature

23.PHGDH heterogeneity potentiates cancer cell dissemination and metastasis.nature

24.Potentiating adoptive cell therapy using synthetic IL-9 receptors.nature

25.Mechanisms of APOBEC3 mutagenesis in human cancer cells.nature

26.Activation of γ-globin expression by hypoxia-inducible factor 1α.nature

27.p53 directs leader cell behavior, migration, and clearance during epithelial repair.science

28.Enhanced T cell effector activity by targeting the Mediator kinase module. Science

《實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析開啟免疫細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)新格局》