手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過(guò)內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。
熒光PCR方法檢測(cè)病原體已成為常規(guī)檢測(cè)技術(shù)，在工作過(guò)程中我們也遇到了各種各樣、千奇百怪的問(wèn)題，那么在PCR儀出現(xiàn)故障的時(shí)候應(yīng)該怎么解決呢？
01反應(yīng)后反應(yīng)管壁出現(xiàn)液滴?
原因1：運(yùn)行程序前沒(méi)有開(kāi)啟熱蓋加熱功能
解決方法：開(kāi)啟熱蓋加熱功能
原因2：反應(yīng)結(jié)束后低溫保存時(shí)間過(guò)久
解決方法：運(yùn)行結(jié)束后，熱蓋將自動(dòng)關(guān)閉，所以冷凝會(huì)自然出現(xiàn)，這不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，將反應(yīng)管置于離心機(jī)上瞬時(shí)離心機(jī)使液滴回到管子底部即可。
02反應(yīng)管氣泡在 PCR 反應(yīng)時(shí)，加熱破裂
反應(yīng)時(shí)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)了氣泡，導(dǎo)致中途產(chǎn)生了較大的波動(dòng)，其特點(diǎn)是單個(gè)樣本的幾個(gè)通道的熒光曲線同時(shí)在某個(gè)循環(huán)出現(xiàn)趨勢(shì)一致的波動(dòng)。
分析原因：氣泡在 PCR 反應(yīng)的過(guò)程中被加熱，在某個(gè)時(shí)刻破裂，此時(shí)出現(xiàn)熒光擾動(dòng)，在這個(gè)循環(huán)檢測(cè)到的熒光型號(hào)和上一個(gè)循環(huán)不一樣，此時(shí)如果波動(dòng)位于基線期很可能就被軟件識(shí)別為開(kāi)始擴(kuò)增的拐點(diǎn)，擴(kuò)增曲線就會(huì)產(chǎn)生結(jié)果。
03使用微孔板，
反應(yīng)后反應(yīng)液有明顯蒸發(fā)？
方法1：確保使用高質(zhì)量的微孔板，反應(yīng)前要嚴(yán)格密封；
方法2：確保蓋熱蓋，適當(dāng)提高熱蓋的溫度；
方法3：增大反應(yīng)體積。
04使用PCR管，
反應(yīng)后PCR的管內(nèi)反應(yīng)液有明顯蒸發(fā)？
方法1：確保使用高質(zhì)量的PCR管；
方法2：在樣品臺(tái)的四角放置四個(gè)同樣的空PCR管，以保證熱蓋壓在哥PCR管上的壓力均勻。
05PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，
樣品可以一直放在PCR儀中低溫保存嘛？
當(dāng)程序運(yùn)行結(jié)束后，及時(shí)取出樣品并停止儀器運(yùn)行，而不要把儀器當(dāng)“冰箱”使用，低溫保存時(shí)溫度盡量設(shè)定得比較高，如8℃，這可以延長(zhǎng)儀器的使用壽命。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心