簡(jiǎn)述核酸電泳技術(shù)的分類和基礎(chǔ)原理
核酸電泳技術(shù)是生物化學(xué)中廣泛的一種技術(shù),是指使用電流來(lái)操縱蛋白質(zhì)分子以用于一系列生物醫(yī)學(xué)研究、診斷和制造目的實(shí)驗(yàn)的過(guò)程。
目前核酸電泳技術(shù)分為以下4種:凝膠電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、等電聚焦電泳、毛細(xì)管電泳。
1.凝膠電泳
凝膠電泳是常用的一種蛋白表達(dá)分析技術(shù)。
技術(shù)原理是根據(jù)檢體中蛋白質(zhì)分子量大小的不同,使其在電泳膠中分離。在大腸桿菌表達(dá)純化外源蛋白的實(shí)驗(yàn)中,SDS-PAGE更是較常用的操作。
技術(shù)應(yīng)用是檢測(cè)蛋白的表達(dá)情況(表達(dá)量,表達(dá)分布),以及分析目的蛋白的純度等。聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)用于分離蛋白質(zhì)較小分子核酸。瓊脂糖凝膠電泳適用于分離同工酶及其亞型、大分子核酸等。
2.醋酸纖維素薄膜電泳
醋酸纖維薄膜電泳操作簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)。
技術(shù)原理以醋酸纖維薄膜為支持物,由纖維素的羥基經(jīng)乙?;瞥?。這種薄膜對(duì)蛋白質(zhì)吸附小,能消除電泳中出現(xiàn)的“托尾”現(xiàn)象,具有分離速度快、樣品用量小的特點(diǎn),適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。
技術(shù)應(yīng)用于血清蛋白、血紅蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、類固醇激素及同工酶等的分離分析中,盡管它的分辨力比聚丙酰胺凝膠電泳低,但它具有簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)。
3.等電聚焦電泳
等電聚焦電泳是在電場(chǎng)中分離蛋白質(zhì)技術(shù)的一個(gè)重要發(fā)展。
技術(shù)原理是在穩(wěn)定的pH梯度中按等電點(diǎn)的不同來(lái)分離兩性大分子。
技術(shù)應(yīng)用于分離分子量相近而等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)組分,在區(qū)帶電泳中分辨率最好。常用的pH梯度支持介質(zhì)有聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠等。
4.毛細(xì)管電泳
毛細(xì)管電泳又稱高效毛細(xì)管電泳。
技術(shù)原理是以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的將液相分離,是一種利用電泳和電滲流的電動(dòng)力學(xué)原理,在一種空芯的微小內(nèi)徑的毛細(xì)管中進(jìn)行混合物的高效分離技術(shù)。
毛細(xì)管電泳分類為:毛細(xì)管自由溶液區(qū)帶電泳、毛細(xì)管凝膠電泳、毛細(xì)管等電聚焦電泳及膠束毛細(xì)管電動(dòng)力學(xué)色譜。
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