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Countess II 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀操作方法
操作指南
拆開(kāi)Countess II 包裝,設(shè)置演示設(shè)備
打開(kāi)包裝盒,取出附件包裝盒,拆開(kāi)Countess II 設(shè)備的包裝
插上Countess II 插頭,將USB驅(qū)動(dòng)器插入儀器前方的USB端口內(nèi)。
打開(kāi)儀器電源
儀器將顯示“開(kāi)始”(Start) 界面,指導(dǎo)用戶(hù)插入計(jì)數(shù)板。設(shè)備現(xiàn)在可進(jìn)行計(jì)數(shù)。
從包裝紙中取出Countess計(jì)數(shù)板
保存包裝紙,以供后面的細(xì)胞溶液 (若使用) 與臺(tái)盼藍(lán)活性染料稀釋使用
混勻細(xì)胞/微珠——晃動(dòng)并上下吹打 (渦旋振蕩)
吸取10 uL細(xì)胞樣本至包裝紙上
在包裝紙上加入10 uL臺(tái)盼藍(lán)染料至細(xì)胞/微珠樣本中 (使用新吸頭,確保臺(tái)盼藍(lán)染料不被污染)
上下吹打混勻5次
吸取樣本,加入Countess計(jì)數(shù)板邊緣的半月形上樣口中。
計(jì)數(shù)板現(xiàn)可直接使用。
插入計(jì)數(shù)板
將計(jì)數(shù)板插入Countess儀器,首先插入樣本側(cè)——在彈簧壓力下推動(dòng)計(jì)數(shù)板,直到聽(tīng)到咔嗒聲
儀器將自動(dòng)聚焦——確認(rèn)焦距是否正確:微珠和活細(xì)胞應(yīng)呈規(guī)則的球形,中心亮,邊緣暗。下圖
調(diào)整“光源”(Light Source) 滑塊 (屏幕右側(cè),“采集按鈕”(Capture) 上方),在背景光和單個(gè)細(xì)胞之
——請(qǐng)注意“活”細(xì)胞應(yīng)中間明亮,如下圖所
演示縮放和手動(dòng)聚焦滑塊 (位于顯示界面的左側(cè))
縮放滑塊提供了目標(biāo)區(qū)域的詳細(xì)視圖。用手指來(lái)回“平移”,選擇顯示區(qū)域,從而找到目標(biāo)區(qū)域。
焦距滑塊調(diào)整焦平面,它與縮放功能結(jié)合使用,可以獲得準(zhǔn)確的焦距。(參見(jiàn)聚焦說(shuō)明,上文第
步和下圖)
采集和查看結(jié)果
按下“采集”(Capture) 按鈕采集數(shù)據(jù)——儀器將采集圖像,分析圖像視野中的顆粒 (細(xì)胞或微珠)
細(xì)胞計(jì)數(shù)需要大約10秒
請(qǐng)注意“活細(xì)胞”和“死細(xì)胞”群體以%和絕對(duì)數(shù)值顯示。
優(yōu)化細(xì)胞計(jì)數(shù)
按下“調(diào)整”(Adjust) 按鈕,精細(xì)控制數(shù)據(jù)選擇
調(diào)整圓度滑塊——請(qǐng)注意,識(shí)別的細(xì)胞群體會(huì)隨圓度變化實(shí)時(shí)更新。
如果需要,可以調(diào)整亮度門(mén)限值和顆粒大小門(mén)限值——這些滑塊表示群體“窗口”。默認(rèn)窗口設(shè)置
100% (查看所有數(shù)據(jù)),因此在默認(rèn)設(shè)置下并未設(shè)置數(shù)值閾值。
100%時(shí),滑塊不可移動(dòng)
要調(diào)整門(mén)限窗口大小,使用滑塊上方和下方的按鈕——請(qǐng)注意窗口大小 (在滑塊內(nèi)以有顏色的柱
) 會(huì)放大和縮小。
當(dāng)門(mén)限窗口小于100%時(shí),滑塊將調(diào)整窗口的相對(duì)位置,使數(shù)據(jù)可用于后續(xù)計(jì)算。
選擇好目標(biāo)數(shù)據(jù)后,按下“完成”(Done)。
保存結(jié)果
按下“保存”(Save) 按鈕
將數(shù)據(jù)文件保存在常用的根目錄下,在數(shù)據(jù)保存界面左上方的“文件名稱(chēng)”(File name) 欄中顯示
選擇任意“結(jié)果”(Result)、“圖像”(Images) 或“數(shù)據(jù)”(Data) 組合。
從下拉菜單中選擇文件類(lèi)型。
確保USB驅(qū)動(dòng)器插入前面板的USB端口中
按下“保存”(Save),將數(shù)據(jù)寫(xiě)入U(xiǎn)SB驅(qū)動(dòng)器。
Countess II儀器的內(nèi)部存儲(chǔ)空間內(nèi)。數(shù)據(jù)只能通過(guò)USB保存至與儀器相
數(shù)據(jù)保存后將顯示界面,恢復(fù)至初始的計(jì)數(shù)“開(kāi)始”(Start) 界面。
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