1、液相生物柱的使用說(shuō)明:
(1)液相生物柱使用前注意事項(xiàng):生物柱的儲(chǔ)存液無(wú)特殊說(shuō)明,均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前,一定要注意生物柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相生物中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,堵塞生物柱。
(2)流動(dòng)相:流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用生物純,配流動(dòng)相的水要是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和生物系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0,BDS C18適合于堿性化合物,PH值適用范圍為2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用生物柱時(shí),每次使用結(jié)束后立即用適合于生物柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。
(3)樣品:樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理,要使用保護(hù)柱。在用正相生物法分析樣品時(shí),所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
2、液相生物柱的保存:
(1)反相生物柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng):使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉生物柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
(2)長(zhǎng)時(shí)間保存生物柱:如生物柱要長(zhǎng)時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲(chǔ)存于水(含防腐劑疊蛋化鈉或柳硫汞)中,并將購(gòu)買(mǎi)新生物柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度是室溫。
3、液相生物柱的再生:
因?yàn)樯镏窍钠罚S著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加,會(huì)出現(xiàn)生物峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,一般來(lái)說(shuō)可能是柱效下降。
(1)反相柱的再生:依次采用20-30倍的生物柱體積的甲醇:水=10:90 (V/V),乙腈,異丙醇作為流動(dòng)相沖洗生物柱,完成后再以相反順序沖洗生物柱。
(2)正相柱的再生:依次以20-30倍生物柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗生物柱,然后再以相反的順序沖洗生物柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。
4、液相生物柱在使用過(guò)程中易出現(xiàn)的問(wèn)題和解決辦法:
生物柱在使用中常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高,如果柱壓是在長(zhǎng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加,屬于正?,F(xiàn)象。但柱壓在使用過(guò)程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外),以下列舉了部分常見(jiàn)原因及解決辦法:
(1)生物柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染;
解決方法:如確定是生物柱頭的過(guò)濾篩板被污染,可以將生物柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下生物柱頭,將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘,后再用純水超聲10分鐘,重新裝入生物柱。
(2)生物柱頭的填料被樣品污染;
解決方法:如確定生物柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細(xì)修復(fù)后,重新安裝上柱頭螺絲。
(3)生物柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑,形成結(jié)晶析出; 解決方法:如確定定是鹽結(jié)晶,用10%的甲醇/水沖洗生物柱使柱內(nèi)鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。
(4)流動(dòng)相PH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。解決方法:如果因PH值使用不當(dāng),很難恢復(fù)。
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