熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
熒光分光光度計基本結(jié)構(gòu):
1. 光源:
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜,且在300nm~400nm 范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等,故較常用。
2.激發(fā)單色器:
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或**單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。
3.發(fā)射單色器:
置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4. 檢測器:
一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉(zhuǎn)為電信號。
5. 樣品室:
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角安排;測量固體時,光源與檢測器成銳角安排。
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