紅細(xì)胞去除試劑盒的使用方法！

一、背景及概述

紅細(xì)胞去除試劑盒使用浮力，能夠清除掉樣本中99%以上的紅細(xì)胞，同時(shí)并不殘留血紅蛋白等物質(zhì)，使得目的細(xì)胞使用不受紅細(xì)胞的干擾，能夠更好的進(jìn)行下游應(yīng)用和分析。

二、使用方法

CN201110097319.7 提供了一種用于體外分離純化骨髓、臍帶血或外周血中有核細(xì)胞并且能去除紅細(xì)胞的試劑盒以及該試劑盒的使用方法。本發(fā)明所述的試劑盒包括各自隔離包裝的沉淀液、純化液、懸浮液和紅細(xì)胞裂解液，其中沉淀液是溶于生理鹽水的羥乙基淀粉，其重量體積濃度為6％；純化液是聚蔗糖泛影鈉；懸浮液是生理鹽水；紅細(xì)胞裂解液包括各自隔離包裝的兩種原液，其中原液1號(hào)由以下配方組 成：10g/L葡萄糖、0.6g/L磷酸二氫鉀、3.58g磷酸氫二鈉·7H2O和0.1g/L酚紅溶液，原液 2號(hào)由以下配方組成：1.86g/L氯化鈣·2H2O、80g/L氯化鈉、1.04g/L氯化鎂和2.0g/L硫酸鎂·7H2O。所謂隔離包裝是指沉淀液、純化液和懸浮液各自密封在互不相通的容器中，優(yōu)選地，各自獨(dú)立包裝。

使用方法包括如下步驟：

(1)將經(jīng)過抗凝處理的骨髓/臍帶血/外周血倒入沉淀液試劑瓶中，擰緊瓶蓋顛倒混勻 5次，擰松瓶蓋，靜置22?25分鐘。

(2)用10ml的移液管將上清液轉(zhuǎn)到兩個(gè)50ml的離心管中，不要吸到紅細(xì)胞沉淀，并配平。

(3)將兩個(gè)離心管4℃，離心力710xg(轉(zhuǎn)速2000rpm)，5分鐘離心，離心完畢后，棄去上清，用手指輕輕震開沉淀，每管加25ml生理鹽水重懸細(xì)胞。

(4)將純化液按每管25ml加到另外兩個(gè)50ml新的離心管中，將第3步中的細(xì)胞懸液用移液管緩慢加到純化液的液面上，保證兩種液體之間的液面清晰，然后，4℃，離心力710xg(轉(zhuǎn)速2000rpm)，20分鐘離心，關(guān)閉離心機(jī)剎車功能。

(5)離心后，吸取中間層細(xì)胞，加到新的離心管中，用50ml注射用生理鹽水稀釋，配平，4℃，離心力400xg(轉(zhuǎn)速1500rpm)；8分鐘離心洗滌細(xì)胞兩次；

(6)棄上清，向細(xì)胞沉淀中加入應(yīng)用液1#，輕輕吹打15～20s混勻，再加入應(yīng)用液2#，輕輕吹打15～20s混勻，后加入應(yīng)用液3#，輕輕吹打15～20s混勻，逐步裂解殘留紅細(xì)胞。

(7)4℃，離心力400xg(轉(zhuǎn)速1500rpm)，8分鐘離心洗滌細(xì)胞三次；

(8)將洗后的細(xì)胞加到懸浮液中，備用。

本發(fā)明所述的試劑盒，使用的樣品類型為骨髓/臍帶血/外周血，可以按照通用的方法收 集所需的骨髓/臍帶血/外周血樣本；確保骨髓/臍帶血/外周血收集后轉(zhuǎn)入一次性抗凝血袋； 骨髓/臍帶血/外周血收集后應(yīng)在6小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分離純化有核細(xì)胞。本發(fā)明所述的試劑盒，回收率可以達(dá)到》90％，分離的有核細(xì)胞活率≥96％，維持了干細(xì)胞在體外微環(huán)境的恒定，且能同時(shí)裂解有核細(xì)胞中的紅細(xì)胞。

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