本試劑盒僅供研究使用。

使用目的

本試劑盒用于測(cè)定山羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中布魯氏菌?。?/span>Brucellosis）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中山羊布魯氏菌病（Brucellosis）水平。用純化的山羊布

魯氏菌?。?/span>Brucellosis）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已

知濃度的布魯氏菌?。?/span>Brucellosis）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的布魯氏菌?。?/span>Brucellosis）待檢樣品，

溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗 IgG 抗體，再與鏈霉親和素-HRP 結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)

過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)

化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的布魯氏菌?。?/span>Brucellosis）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在

450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中山羊布魯氏菌?。?/span>Brucellosis）

濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

標(biāo)準(zhǔn)品 S1（160pg/ml）

0.5ml×1 瓶

2 鏈霉親和素-HRP

6ml×1 瓶

標(biāo)準(zhǔn)品 S2（80pg/ml）

0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板

12 孔×8 條

標(biāo)準(zhǔn)品 S3（40pg/ml）

0.5ml×1 瓶

4 生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體

6ml×1 瓶

標(biāo)準(zhǔn)品 S4（20pg/ml ）

0.5ml×1 瓶

5 顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

8

標(biāo)準(zhǔn)品 S5（10pg/ml）

0.5ml×1 瓶

6 顯色劑 B 液

6ml×1/瓶

9

說明書 1 份

7 終止液 6ml×1 瓶

10

封板膜

2 張

標(biāo)本要求

1．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

1. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)

孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣

品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品 50µl，在樣本反應(yīng)孔中加入 50 微升樣本，蓋上封

板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 45 分鐘。

3. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 4 次，拍干。

5. 加生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體 50µl。37℃溫育 30 分

鐘

6. 洗滌：操作同 4。2

7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入 50µl 的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 30

分鐘。

8. 洗滌：操作同 4。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50µl，再加入顯色劑 B 50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值待入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間醉好

控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔地一孔的 OD 值），請(qǐng)先將樣本

稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑 B 請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

線性范圍6.0pg/ml-160pg/ml

規(guī)格96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月