培養(yǎng)細胞的訣竅有哪些

    細胞可是許多生物學(xué)實驗的主角。假如細胞長不好，那么實驗的結(jié)果也不會好到哪兒去。細胞可是許多生物學(xué)實驗的主角。在此引見了讓細胞快樂的十個竅門。
    1. 確保一切實驗室資料都無菌 穿插污染是細胞培育的大敵。即便是zui細微的污染，也可能毀了幾個星期的成果。因培育箱內(nèi)暖和濕潤，真菌極易生長，因而必需留意定期清潔。此外，在將培育瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺之前，應(yīng)用酒精擦拭潔凈，以防止污染。

  2. 當(dāng)心處置您的培育物 細胞培育的脆弱性怎樣強調(diào)也不為過。猛烈搖擺，或連續(xù)的溫度動搖可能會對生長產(chǎn)生不利的影響。確保培育箱是程度的，溫度均一，且遠離電動儀器。此外，盡量防止一次處置多個細胞系，由于它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應(yīng)定期完成STR圖譜剖析，以確認細胞系的身份。
  3. 在運用前正確凍結(jié)細胞 雖然凍結(jié)看起來是個簡單的步驟，但必需操作得當(dāng)，以免傷害細胞。長時間暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因而，凍存管應(yīng)當(dāng)在37°C水浴中放置2分鐘，然后用條件培育基稀釋，以防止DMSO形成直接傷害。
  4. 運用對數(shù)生長期的細胞 細胞培育過程共有3個階段：停滯期、對數(shù)期戰(zhàn)爭臺期，分別代表了低細胞生長、高細胞生長和無細胞生長。zui有生機的細胞是安康的，快速團結(jié)的，在對數(shù)期以70-80%的集合度存在。
  5. 在傳代之前不要讓細胞完整集合 集合度是指貼壁細胞占領(lǐng)培育瓶外表積的比例。完整集合意味著100%的外表都被貼壁細胞掩蓋。一定要防止這種狀態(tài)，由于它意味著細胞不能繼續(xù)生長。不過，燃眉之急是運用活潑生長的細胞。
  6. 選擇zui*的培育基開發(fā)戰(zhàn)略 在細胞培育過程中，培育基是控制產(chǎn)質(zhì)量量、產(chǎn)量和本錢的zui重要要素。必需針對每種培育物來定制培育基，以優(yōu)化實驗結(jié)果。在決議以哪種方式來開發(fā)您的培育基時，您有幾個選擇。您能夠購置現(xiàn)成的，本人開發(fā)，也能夠與另一家公司協(xié)作開發(fā)特定的培育基。在這個過程中，您需求思索時間和本錢等要素。
  7. 配制干粉培育基時評價水的質(zhì)量 液體培育基常常會帶來比干粉培育基更高質(zhì)量的結(jié)果。這可能與水的質(zhì)量有關(guān)。由于細菌在水中疾速生長，故需求監(jiān)控內(nèi)毒素及其他污染物。商業(yè)公司有資源來監(jiān)控和控制細菌生長，比方過濾器。因而運用商業(yè)化消費的液體培育基會愈加牢靠一點。
  8. 應(yīng)用細胞的代謝特性來優(yōu)化培育基 剖析運用過的培育基，有助于審定必要成分的代謝速率，包括氨基酸和維生素。從細胞生長階段和蛋白消費階段搜集到的動態(tài)代謝圖譜可用來均衡根底培育基和添加培育基，指導(dǎo)培育基的重點，有助于蛋白質(zhì)的消費。
  9. 防止細胞的過度消化 胰蛋白酶經(jīng)過消化擔(dān)任讓細胞與容器分離的蛋白質(zhì)，而完成貼壁細胞的傳代。假如細胞暴露在胰酶中時間太長，則胰酶將開端切割細胞外表蛋白，這會影響細胞行駛正常功用的才能。
  10. 培育基中不要不斷運用抗生素 隨著細胞培育物愈加頻繁地暴露在抗生素中，對立生素有著自然耐藥性的菌株將開端呈現(xiàn)。這種現(xiàn)象可掩蓋潛在的污染。