流式細胞術(shù)(flow cytometry,F(xiàn)CM)是一種可以對細胞或亞細胞結(jié)構(gòu)進行快速測量的新型分析技術(shù)和分選技術(shù)。其特點是:
①測量速度快,zui快可在1s內(nèi)計測數(shù)萬個細胞;
②可進行多參數(shù)測量,可以對同一個細胞做有關(guān)物理特性、化學特性的多參數(shù)測量,并具有明顯的統(tǒng)計學意義;
③是一門綜合性的高科技方法,它綜合了激光技術(shù)、計算機技術(shù)、流體力學、細胞化學、圖像技術(shù)等眾多領(lǐng)域的知識和成果;
④既是細胞分析技術(shù),又是的分選技術(shù)。FCM的數(shù)據(jù)顯示方式包括單參數(shù)直方圖(his-togram)、二維點圖(dot-plot)、二維等高圖(con-tour)、假三維圖(pseudo 3D)和列表模式1istmode)等。流式細胞儀分析技術(shù)是一種重要的免疫學技術(shù)平臺,可以實現(xiàn)快速敏感地檢測微生物。與傳統(tǒng)免疫熒光和ELISA檢測技術(shù)相比,它可以將散射信號(scatter signal)和熒光強度結(jié)合起來分析zui終結(jié)果,Stopa等用純芽孢試驗表明,與近緣菌株交Y-N.應(yīng)的散射信號和熒光強度與同種反應(yīng)的不同,這就增加了流式細胞儀分析技術(shù)的選擇性和特異性,降低了假陽性率,這一結(jié)論有待檢測現(xiàn)場標本驗證。用流式細胞分析技術(shù)的另一優(yōu)點就是可以進一步限制熒光強度在結(jié)果評價中的作用,我們可以限定一個區(qū)域內(nèi)必須出現(xiàn)熒光才能判斷為陽性,而不是單憑強度漂移來判定。但是,必須注意的是,當標本中含有大量待測細菌時(>107CFU/m1)會出現(xiàn)前帶現(xiàn)象降低熒光強度。
用流式細胞儀分析細菌或芽孢前首先應(yīng)確定待檢對象是否有自發(fā)熒光,研究表明,Sterne株有白發(fā)熒光,而Ames株和Vollum株則沒有自發(fā)熒光。還要測定熒光抗體結(jié)合物有無自發(fā)熒光。然后,就可以確定結(jié)合物對不同株的反應(yīng)性略有差異。一般流式細胞分析技術(shù)能檢測103個/m1以上的細菌或芽孢。所用時間不等。Stopa等發(fā)展了一種僅用5min檢測炭疽芽孢桿菌芽孢的流式細胞分析技術(shù),并且能區(qū)分芽孢的死活。Dang等研究了芽孢滅活方法對流式細胞儀檢測的影響。結(jié)果表明,無論是用多抗,還是用單抗,檢測的熒光都發(fā)生了漂移,但是單抗檢測信號明顯降低,相反,多抗檢測信號大大增加。
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