復(fù)方麻仁丸由火麻仁、大黃、蘆薈、白芍、枳實(shí)等七味中藥制成，具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)之功效，我院臨床應(yīng)用多年，治療大便秘結(jié)、習(xí)慣性便秘等頗有療效。本文運(yùn)用液相色譜法對其大黃中的大黃素進(jìn)行了含量測定，為該制劑的質(zhì)量控制提供快速準(zhǔn)確的測定方法。
1 儀器與試藥 
     P230液相色譜儀，UV230紫外檢測器，EC2000色譜工作站，Sartorius BP211D型電子分析天平(德國賽多利斯公司)；KQ100DB超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器廠)；大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所)；復(fù)方麻仁丸(30g/瓶)及陰性樣品(本院中藥制劑室，樣品批號：020822，021128，030410)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2．1 色譜條件 
     色譜柱：Techsphese ODS-C18(4.6mm×250mm，5um)；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸(80：20：1)；檢測波長：254nm；流速：1ml/min；靈敏度：0.02AUFS；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20u1；保留時(shí)間：13．5分鐘；理論塔板數(shù)：以大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3500。
2．2 供試品溶液制備 
     取復(fù)方麻仁丸20粒充分研細(xì)，精密稱取細(xì)粉5g，置具塞錐瓶中，加稀鹽酸3ml濕潤，精密加入甲醇20ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，超聲處理30min，放冷。再精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過。精密量取續(xù)濾液5ml置lOml量瓶中，加甲醇至刻度，制成供試品溶液；另取缺大黃的陰性樣品同法制得陰性對照液；精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24h的大黃素對照品12.5mg置5Oml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每ml含大黃素250ug的對照品溶液。
2．3 線性關(guān)系考察 
     精密吸取大黃素對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.Om1分別置lOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取以上各濃度溶液及對照品溶液各20u1，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以大黃素峰面積對其濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=5.9754×lO000C一8.1135XlO000．R=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，大黃素進(jìn)樣量在0.5～5.0ug范圍內(nèi)與吸收峰面積值呈良好的線性關(guān)系。
2．4 精密度試驗(yàn) 
    精密吸取大黃素對照品溶液(80ug/ml)20ul，分別按上述色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，測得大黃素峰面積RSD值為0.99％。
2．5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 
     精密吸取新鮮配制的樣品溶液，每隔2h進(jìn)樣20ul，測得峰面積并計(jì)算，結(jié)果大黃素的日內(nèi)RSD為1.5％(n=12)，表明樣品溶液在24h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。
2．6 重復(fù)性試驗(yàn)
     平行稱取同一批號(030410)樣品6份，按“2．2”供試品溶液制備項(xiàng)下方法處理，依上述色譜條件進(jìn)樣20ul，測定并計(jì)算含量，結(jié)果大黃素平均含量為40.50mg/100g，RSD為0.57％。
2．7 干擾試驗(yàn) 
     取陰性樣品對照液，按上述色譜條件測定，結(jié)果可見，樣品色譜中與對照品溶液在相同的保留時(shí)間(tR=13.5min)有相似的色譜峰，而陰性樣品無此峰，說明復(fù)方麻仁丸的其它成分對大黃素的測定無干擾，且樣品中大黃素與其它成分峰可達(dá)到基線分離，分離度大于1.5。
2．8 加樣回收率試驗(yàn)
      精密稱取已知大黃素含量的復(fù)方麻仁丸(批號030410)細(xì)粉約2.5g，共6份，2份為一組，每一組分別加入大黃素對照品溶液(72.6ug/ml、96.8ug/ml、121.0ug/ml)各10ml，按“2．2”供試品溶液項(xiàng)下制備，依上述色譜條件測定大黃素含量并計(jì)算回收率。
2．9 樣品測定 
     取三個(gè)批號的樣品，分別按“2．2”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，依上述色譜條件，注入液相色譜儀，外標(biāo)峰面積法計(jì)算樣品中大黃素的含量。
3 討論 
3．1 色譜條件選擇 
     參考有關(guān)文獻(xiàn)，對大黃素對照品溶液在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在254nm波長處有zui大吸收且靈敏度zui高，故選擇254nm為檢測波長；經(jīng)多種比例流動(dòng)相選擇，認(rèn)為甲醇-水-冰醋酸(80：20：1)*，此條件下可免除干擾，使樣品中的大黃素分離度好，峰形尖銳。
3．2 提取方法研究
     樣品提取先后采用了加熱回流提取、甲醇24h冷浸、鹽酸-甲醇(3：20)超聲處理等方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鹽酸-甲醇(3：20)超聲處理30min測得的大黃素含量較高，且操作簡便。