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顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)

來(lái)源:北京京百卓顯唐津辦事處   2011年05月13日 11:21  

       顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)主要包括物鏡、目鏡、反光鏡和聚光器四個(gè)部件。廣義的說(shuō)也包括照明光源、濾光器、蓋玻片和載玻片等。
(一)、物鏡
   物鏡是決定顯微鏡性能的zui重要部件,安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上,接近被觀察的物體,故叫做物鏡或接物鏡。
1、物鏡的分類(lèi)
     物鏡根據(jù)使用條件的不同可分為干燥物鏡和浸液物鏡;其中浸液物鏡又可分為水浸物鏡和油浸物鏡(常用放大倍數(shù)為90—100倍)。
根據(jù)放大倍數(shù)的不同可分為 低倍物鏡(10倍以下)、中倍物鏡(20倍左右)高倍物鏡(40—65倍)。
根據(jù)像差矯正情況,分為消色差物鏡(常用,能矯正光譜中兩種色光的色差的物鏡)和復(fù)色差物鏡(能矯正光譜中三種色光的色差的物鏡,價(jià)格貴,使用少)。
(所謂象差是指所成的像與原物在形狀上的差別;色差是指所成的像與原物在顏色上的差別)
(消除色差(當(dāng)不同波長(zhǎng)的光線通過(guò)透鏡的時(shí)候,它們折射的方向略有不同,這導(dǎo)致了成像質(zhì)量的下降)
2、物鏡的主要參數(shù):
   物鏡主要參數(shù)包括:放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑和工作距離。
①、放大倍數(shù)是指眼睛看到像的大小與對(duì)應(yīng)標(biāo)本大小的比值。它指的是長(zhǎng)度的比值而不是面積的比值。例:放大倍數(shù)為100×,指的是長(zhǎng)度是1μm的標(biāo)本,放大后像的長(zhǎng)度是100μm,要是以面積計(jì)算,則放大了10,000倍。
顯微鏡的總放大倍數(shù)等于物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。
②、數(shù)值孔徑也叫鏡口率,簡(jiǎn)寫(xiě)N•A 或A,是物鏡和聚光器的主要參數(shù),與顯微鏡的分辨力成正比。干燥物鏡的數(shù)值孔徑為0.05-0.95,油浸物鏡(香柏油)的數(shù)值孔徑為1.25。
③、工作距離是指當(dāng)所觀察的標(biāo)本zui清楚時(shí)物鏡的前端透鏡下面到標(biāo)本的蓋玻片上面的距離。物鏡的工作距離與物鏡的焦距有關(guān),物鏡的焦距越長(zhǎng),放大倍數(shù)越低,其工作距離越長(zhǎng)。例:10倍物鏡上標(biāo)有10/0.25和160/0.17,其中10為物鏡的放大倍數(shù);0.25為數(shù)值孔徑;160為鏡筒長(zhǎng)度(單位mm);0.17為蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度(單位 mm)。10倍物鏡有效工作距離為6.5mm,40倍物鏡有效工作距離為0.48mm 。
3、物鏡的作用是將標(biāo)本作*次放大,它是決定顯微鏡性能的zui重要的部件——分辨力的高低。
分辨力也叫分辨率或分辨本領(lǐng)。分辨力的大小是用分辨距離(所能分辨開(kāi)的兩個(gè)物點(diǎn)間的zui小距離)的數(shù)值來(lái)表示的。在明視距離(25cm)之處,正常人眼所能看清相距0.073mm的兩個(gè)物點(diǎn),這個(gè)0.073mm的數(shù)值,即為正常人眼的分辨距離。顯微鏡的分辨距離越小,即表示它的分辨力越高,也就是表示它的性能越好。
顯微鏡的分辨力的大小由物鏡的分辨力來(lái)決定的,而物鏡的分辨力又是由它的數(shù)值孔徑和照明光線的波長(zhǎng)決定的。
當(dāng)用普通的*照明法(使光線均勻地透過(guò)標(biāo)本的明視照明法)時(shí),顯微鏡的分辨距離為d=0.61λ/N•A
式中d——物鏡的分辨距離,單位  nm。
    λ——照明光線波長(zhǎng),單位  nm。
    N•A ——物鏡的數(shù)值孔徑
例如油浸物鏡的數(shù)值孔徑為1.25,可見(jiàn)光波長(zhǎng)范圍為400—700nm ,取其平均波長(zhǎng)550 nm,則d=270 nm,約等于照明光線波長(zhǎng)一半。一般地,用可見(jiàn)光照明的顯微鏡分辨力的極限是0.2μm。
(二)、目鏡
因?yàn)樗拷^察者的眼睛,因此也叫接目鏡。安裝在鏡筒的上端。
1、目鏡的結(jié)構(gòu)
通常目鏡由上下兩組透鏡組成,上面的透鏡叫做接目透鏡,下面的透鏡叫做會(huì)聚透鏡或場(chǎng)鏡。上下透鏡之間或場(chǎng)鏡下面裝有一個(gè)光闌(它的大小決定了視場(chǎng)的大?。?,因?yàn)闃?biāo)本正好在光闌面上成像,可在這個(gè)光闌上粘一小段毛發(fā)作為指針,用來(lái)指示某個(gè)特點(diǎn)的目標(biāo)。也可在其上面放置目鏡測(cè)微尺,用來(lái)測(cè)量所觀察標(biāo)本的大小。
目鏡的長(zhǎng)度越短,放大倍數(shù)越大(因目鏡的放大倍數(shù)與目鏡的焦距成反比)。
2、目鏡的作用
是將已被物鏡放大的,分辨清晰的實(shí)像進(jìn)一步放大,達(dá)到人眼能容易分辨清楚的程度。
常用目鏡的放大倍數(shù)為5—16倍。
3、目鏡與物鏡的關(guān)系
物鏡已經(jīng)分辨清楚的細(xì)微結(jié)構(gòu),假如沒(méi)有經(jīng)過(guò)目鏡的再放大,達(dá)不到人眼所能分辨的大小,那就看不清楚;但物鏡所不能分辨的細(xì)微結(jié)構(gòu),雖然經(jīng)過(guò)高倍目鏡的再放大,也還是看不清楚,所以目鏡只能起放大作用,不會(huì)提高顯微鏡的分辨率。有時(shí)雖然物鏡能分辨開(kāi)兩個(gè)靠得很近的物點(diǎn),但由于這兩個(gè)物點(diǎn)的像的距離小于眼睛的分辨距離,還是無(wú)法看清。所以,目鏡和物鏡即相互,又彼此制約。
(三)、聚光器
聚光器也叫集光器。位于標(biāo)本下方的聚光器支架上。它主要由聚光鏡和可變光闌組成。其中,聚光鏡可分為明視場(chǎng)聚光鏡(普通顯微鏡配置)和暗視場(chǎng)聚光鏡。
1、光鏡的主要參數(shù)
數(shù)值孔徑(N•A )是聚光鏡的主要參數(shù),zui大數(shù)值孔徑一般是1.2—1.4,數(shù)值孔徑有一定的可變范圍,通??淘谏戏酵哥R邊框上的數(shù)字是代表zui大的數(shù)值孔徑,通過(guò)調(diào)節(jié)下部可變光闌的開(kāi)放程度,可得到此數(shù)字以下的各種不同的數(shù)值孔徑,以適應(yīng)不同物鏡的需要。有的聚光鏡由幾組透鏡組成,zui上面的一組透鏡可以卸掉或移出光路,使聚光鏡的數(shù)值孔徑變小,以適應(yīng)低倍物鏡觀察時(shí)的照明。
2、聚光鏡的作用
聚光鏡的作用相當(dāng)于凸透鏡,起會(huì)聚光線的作用,以增強(qiáng)標(biāo)本的照明。一般地把聚光鏡的聚光焦點(diǎn)設(shè)計(jì)在它上端透鏡平面上方約1.25mm處。(聚光焦點(diǎn)正在所要觀察的標(biāo)本上,載玻片的厚度為1.1mm左右)
3、可變光闌
可變光闌也叫光圈,位于聚光鏡的下方,由十幾張金屬薄片組成,中心部分形成圓孔。其作用是調(diào)節(jié)光強(qiáng)度和使聚光鏡的數(shù)值孔徑與物鏡的數(shù)值孔徑相適應(yīng)??勺児怅@開(kāi)得越大,數(shù)值孔徑越大(觀察完畢后,應(yīng)將光圈調(diào)至zui大)。
在可變光闌下面,還有一個(gè)圓形的濾光片托架。
(四)反光鏡
反光鏡是一個(gè)可以隨意轉(zhuǎn)動(dòng)的雙面鏡,直徑為50mm,一面為平面,一面為凹面,其作用是將從任何方向射來(lái)的光線經(jīng)通光孔反射上來(lái)。平面鏡反射光線的能力較弱,是在光線較強(qiáng)時(shí)使用,凹面鏡反射光線的能力較強(qiáng),是在光線較弱時(shí)使用。
反光鏡通常一面是平面鏡,另一面是凹面鏡,裝在聚光器下面,可以在水平與垂直兩個(gè)方向上任意旋轉(zhuǎn)。
反光鏡的作用是使由光源發(fā)出的光線或天然光射向聚光器。當(dāng)用聚光器時(shí)一般用平面鏡,不用時(shí)用凹面鏡;當(dāng)光線強(qiáng)時(shí)用平面鏡,弱時(shí)用凹面鏡。
觀察完畢后,應(yīng)將反光鏡垂直放置。
(五)照明光源
顯微鏡的照明可以用天然光源或人工光源
1、天然光源
光線來(lái)自天空,是由白云反射來(lái)的。不可利用直接照來(lái)的太陽(yáng)光。
 2、人工光源
①、對(duì)人工光源的基本要求:有足夠的發(fā)光強(qiáng)度;光源發(fā)熱不能過(guò)多。
②、常用的人工光源:顯微鏡燈;日光燈
(六)濾光器
安裝在光源和聚光器之間。作用是讓所選擇的某一波段的光線通過(guò),而吸收掉其他的光線,即為了改變光線的光譜成分或削弱光的強(qiáng)度。分為兩大類(lèi):濾光片和液體濾光器。
(七)蓋玻片和載玻片
蓋玻片和載玻片的表面應(yīng)相當(dāng)平坦,無(wú)氣泡,無(wú)劃痕。選用無(wú)色,透明度好的,使用前應(yīng)洗凈。
蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是0.17±0.02mm,如不用蓋玻片或蓋玻片厚度不合適,都回影響成像質(zhì)量。
載玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是1.1±0.04mm,一般可用范圍是1—1.2mm,若太厚會(huì)影響聚光器效能,太薄則容易破裂。



 
 
 
顯微鏡的機(jī)械裝置             

   
   顯微鏡的機(jī)械裝置是顯微鏡的重要組成部分。其作用是固定與調(diào)節(jié)光學(xué)鏡頭,固定與移動(dòng)標(biāo)本等。主要有鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、與調(diào)焦裝置組成。
(一)、鏡座和鏡臂
    1
、鏡座  作用是支撐整個(gè)顯微鏡,裝有反光鏡,有的還裝有照明光源。
    2
、鏡臂  作用是支撐鏡筒和載物臺(tái)。分固定、可傾斜兩種。
(二)、載物臺(tái)(又稱(chēng)工作臺(tái)、鏡臺(tái))
載物臺(tái)作用是安放載玻片,形狀有圓形和方形兩種,其中方形的面積為120mm×110mm。中心有一個(gè)通光孔,通光孔后方左右兩側(cè)各有一個(gè)安裝壓片夾用的小孔。分為固定式與移動(dòng)式兩種。有的載物臺(tái)的縱橫坐標(biāo)上都裝有游標(biāo)尺,一般讀數(shù)為0.1mm,游標(biāo)尺可用來(lái)測(cè)定標(biāo)本的大小,也可用來(lái)對(duì)被檢部分做標(biāo)記。
(三)、鏡筒
鏡筒上端放置目鏡,下端連接物鏡轉(zhuǎn)換器。分為固定式和可調(diào)節(jié)式兩種。機(jī)械筒長(zhǎng)(從目鏡管上緣到物鏡轉(zhuǎn)換器螺旋口下端的距離稱(chēng)為鏡筒長(zhǎng)度或機(jī)械筒長(zhǎng))不能變更的叫做固定式鏡筒,能變更的叫做調(diào)節(jié)式鏡筒,新式顯微鏡大多采用固定式鏡筒,國(guó)產(chǎn)顯微鏡也大多采用固定式鏡筒,國(guó)產(chǎn)顯微鏡的機(jī)械筒長(zhǎng)通常是160mm。
安裝目鏡的鏡筒,有單筒和雙筒兩種。單筒又可分為直立式和傾斜式兩種,雙筒則都是傾斜式的。其中雙筒顯微鏡,兩眼可同時(shí)觀察以減輕眼睛的疲勞。雙筒之間的距離可以調(diào)節(jié),而且其中有一個(gè)目鏡有屈光度調(diào)節(jié)(即視力調(diào)節(jié))裝置,便于兩眼視力不同的觀察者使用。(四)、物鏡轉(zhuǎn)換器
物鏡轉(zhuǎn)換器固定在鏡筒下端,有34個(gè)物鏡螺旋口,物鏡應(yīng)按放大倍數(shù)高低順序排列。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器時(shí),應(yīng)用手指捏住旋轉(zhuǎn)碟旋轉(zhuǎn),不要用手指推動(dòng)物鏡,因時(shí)間長(zhǎng)容易使光軸歪斜,使成像質(zhì)量邊壞。
(五)、調(diào)焦裝置
顯微鏡上裝有粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。有的顯微鏡粗準(zhǔn)焦螺旋與裝在同一軸上,大螺旋為粗準(zhǔn)焦螺旋,小螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋;有的則分開(kāi)安置,位于鏡臂的上端較大的一對(duì)螺旋為是粗準(zhǔn)焦螺旋,其轉(zhuǎn)動(dòng)一周,鏡筒上升或下降10mm。 位于粗準(zhǔn)焦螺旋下方較小的一對(duì)螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,其轉(zhuǎn)動(dòng)一周,鏡筒升降值為0.1mm,細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦范圍不小于1.8mm。
   
               
            
  
    
   
       

  顯微鏡及其部件的使用        

1
、使用單筒顯微鏡時(shí),要養(yǎng)成用左眼觀察的習(xí)慣(因一般用右手畫(huà)圖),觀察時(shí)要兩眼同時(shí)睜開(kāi),不要睜一只閉一只,因?yàn)檫@樣易于疲勞。為了訓(xùn)練學(xué)生習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開(kāi)觀察,可剪一塊長(zhǎng)約14cm,寬約6cm的長(zhǎng)方形硬紙片,在靠近左端處挖一個(gè)直徑比鏡筒上端外徑略小的圓孔,把圓孔套在鏡筒上段,觀察時(shí)兩眼同時(shí)睜開(kāi),利用紙片的右端擋住右眼的視線,這樣訓(xùn)練一段時(shí)間后,就能習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開(kāi),然后把紙片去掉。
2
、直筒顯微鏡的鏡臂與鏡座連接處,是一個(gè)機(jī)械關(guān)節(jié),可用于調(diào)節(jié)鏡筒的傾斜度,便于觀察,鏡臂不能過(guò)于后傾,一般不超過(guò)40°。但是在使用臨時(shí)裝片觀察時(shí),禁止使用傾斜關(guān)節(jié)(當(dāng)鏡筒傾斜時(shí),載物臺(tái)也隨之傾斜,載玻片上的液體易流出),尤其是裝片內(nèi)含酸性試劑時(shí)嚴(yán)禁使用,以免污損鏡體。
3
、目鏡和物鏡的使用
      一般都是用一個(gè)放大倍數(shù)適中的目鏡(10×)和zui低倍的物鏡開(kāi)始觀察,逐步改用倍數(shù)較高的物鏡,從中找到符合實(shí)驗(yàn)要求的放大倍數(shù)。
轉(zhuǎn)換物鏡時(shí),先用低倍鏡觀察,調(diào)節(jié)到正確的工作距離(成像zui清晰)。如果進(jìn)一步使用高倍物鏡觀察,應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前,把物像中需要放大觀察的部分移至視野*(將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時(shí),視野中的物像范圍縮小了很多)。低倍物鏡和高倍物鏡基本齊焦(同高調(diào)焦),在用低倍物鏡觀察清晰時(shí),換高倍物鏡應(yīng)可以見(jiàn)到物像,但物像不一定很清晰,可以轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋進(jìn)行調(diào)節(jié)。 
     通常認(rèn)為,使用任何一個(gè)物鏡時(shí),有效放大倍數(shù)的上限是1,000乘它的數(shù)值孔徑,下限是250乘它的數(shù)值孔徑。如40×物鏡的數(shù)值孔徑是0.65,則上、下限分別為:1000×0.65=650倍和250×0.65163倍,超過(guò)有效放大倍數(shù)上限的叫做無(wú)效放大,不能提高觀察效果。低于下限的放大倍數(shù)則人眼無(wú)法分辨,不利于觀察。一般*的放大倍數(shù)范圍是500700乘數(shù)值孔徑之間的數(shù)字。
4
、油浸物鏡的使用
使用油浸物鏡時(shí),一般不要使用同高調(diào)焦。同高調(diào)焦只適用于每臺(tái)顯微鏡的原配物鏡,在使用低倍和高倍物鏡時(shí),是一個(gè)極有利的方便條件,但在使用油浸物鏡時(shí),則受到一定限制,一般地說(shuō),用油鏡觀察未加蓋玻片的標(biāo)本片(載玻片)時(shí),利用同高調(diào)焦的安全度較大,而對(duì)于有蓋玻片的標(biāo)本片,要小心使用,因?yàn)橛徒镧R的工作距離很短,在設(shè)計(jì)和裝配時(shí)所考慮的同高是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)厚度蓋玻片的。
       用油浸物鏡時(shí),只在標(biāo)本片上滴香柏油,使油鏡頭與香柏油接觸。觀察完畢后,要及時(shí)進(jìn)行清潔工作,如不及時(shí)進(jìn)行,香柏油粘上灰塵,擦拭時(shí)灰塵粒子可能磨損透鏡,香柏油在空氣中暴露時(shí)間長(zhǎng),還會(huì)變稠、變干,擦拭很困難,對(duì)儀器很不利。擦拭要細(xì)心,動(dòng)作要輕。油浸物鏡前端先用干的擦鏡紙擦一兩次,把大部分油去掉,再用 滴濕的擦鏡紙擦兩次,zui后再用干的擦鏡紙擦一次。標(biāo)本片上的香柏油可用“拉紙法”(即把一小張擦鏡紙蓋在香柏油上,然后在紙上滴一些 ,趁濕把紙往外拉,這樣連續(xù)三四次,即可干凈,一般不會(huì)損壞未加蓋玻片的涂片標(biāo)本)擦凈。擦鏡紙也要防塵,一般在使用前,將每頁(yè)剪成8小塊,貯存在一個(gè)干凈的小培養(yǎng)皿中,用起來(lái)既節(jié)省又方便。
5
、聚光器的使用方法
①、使用聚光器的原因
    當(dāng)放大倍數(shù)增加時(shí),一方面由于放大倍數(shù)越高,透鏡數(shù)目越多,被透鏡吸收的光線也越多;另一方面由于視場(chǎng)(指的是所能看到被檢標(biāo)本的范圍)的亮度與放大倍數(shù)的平方成反比,即放大倍數(shù)越高,視場(chǎng)越暗。為了得到足夠的亮度,必須安裝聚光器,把光線集中到所要觀察的標(biāo)本上。
②、觀察時(shí)聚光器應(yīng)處的高度
      觀察時(shí),要保證得到的觀察效果,聚光器的聚光焦點(diǎn)應(yīng)正好落在標(biāo)本上。要實(shí)現(xiàn)這個(gè)條件,就必須調(diào)節(jié)聚光器的高度。當(dāng)用平行光照明時(shí),聚光器的聚光焦點(diǎn)是在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm之處,因此,人們常常要求在觀察時(shí)將聚光器上升到它上端透鏡平面僅稍稍低于載物臺(tái)平面的高度,這樣聚光焦點(diǎn)就可能落到位于標(biāo)準(zhǔn)厚度載玻片上的標(biāo)本上。當(dāng)使用比標(biāo)準(zhǔn)厚度薄的載玻片來(lái)承放標(biāo)本時(shí),聚光器的位置要相應(yīng)地降低一些,而當(dāng)使用過(guò)厚地載玻片時(shí),聚光焦點(diǎn)只能落在標(biāo)本下方,不利于精細(xì)的觀察。

 
 
③、聚光器與物鏡的配合
      這里所謂的配合,就是使聚光器和物鏡這兩者的數(shù)值孔徑取得一致,以更好的進(jìn)行較為精細(xì)的觀察。假如聚光器的數(shù)值孔徑低于物鏡,那物鏡的部分?jǐn)?shù)值孔徑就浪費(fèi)了,從而達(dá)不到它的zui高分辨力。假如把聚光器的數(shù)值孔徑大于物鏡的數(shù)值孔徑,則一方面不能提高物鏡的規(guī)定分辨力,另一方面反會(huì)由于照明光束過(guò)寬,使物象的清晰度下降。聚光器與物鏡配合的操作方法是:在完成照明、調(diào)焦操作后,取下目鏡直接向鏡筒中看,把聚光器下的可變光闌關(guān)到zui小,再慢慢地開(kāi)大。開(kāi)到它的口徑與所見(jiàn)視場(chǎng)的直徑恰好一樣大,然后按上目鏡,即可進(jìn)行觀察。每轉(zhuǎn)換一次物鏡,都要隨著進(jìn)行依次這樣的配合操作。有的聚光器可變光闌的邊框上刻有表示開(kāi)啟口徑的尺度,可以根據(jù)刻度來(lái)進(jìn)行配合。
6.對(duì)物鏡轉(zhuǎn)換器的精度有兩點(diǎn)要求:同軸和齊焦。所謂同軸:是指每個(gè)物鏡被定位即調(diào)入光路后,物鏡和目鏡的光軸應(yīng)在一條直線上,所謂齊焦:是指用低倍物鏡調(diào)焦后,從低倍轉(zhuǎn)換到高倍物鏡,無(wú)須使用粗調(diào),即可初見(jiàn)物象(但允許細(xì)調(diào))。齊焦又稱(chēng)為"等高轉(zhuǎn)換"。物鏡的齊焦是建筑在下列三條的基礎(chǔ)上:    1機(jī)械筒長(zhǎng)m200毫米;
2目鏡前焦面應(yīng)在鏡筒上端面之下10毫米處(目鏡中間象距離d)全部目鏡設(shè)計(jì)均以此作為基準(zhǔn);
3)物鏡后聚焦與目鏡焦面之間的光學(xué)筒長(zhǎng)是隨著物鏡焦距而變,不是固定的。
熒光顯微鏡的原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)      

       熒光顯微鏡是利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源,經(jīng)過(guò)濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光(如紫外光3650入或紫藍(lán)光4200入)作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過(guò)物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。這樣在強(qiáng)烈的對(duì)襯背景下,即使熒光很微弱也易辨認(rèn),敏感性高,主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究。熒光顯微鏡的基本構(gòu)造是由普通光學(xué)顯微鏡加上一些附件(如熒光光源 、激發(fā)濾片、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎(chǔ)上組成的。熒光光源——般采用超高壓汞燈(50一200W),它可發(fā)出各種波長(zhǎng)的光,但每種熒光物質(zhì)都有一個(gè)產(chǎn)生zui強(qiáng)熒光的激發(fā)光波長(zhǎng) ,所以需加用激發(fā)濾片(一般有紫外、紫色、藍(lán)色和綠色激發(fā)濾片),僅使一定波長(zhǎng)的激發(fā)光透過(guò)照射到標(biāo)本上,而將其他光都吸收掉。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后,在極短時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射波長(zhǎng)更長(zhǎng)的可見(jiàn)熒光。熒光具有專(zhuān)一性,一般都比激發(fā)光弱,為能觀察到專(zhuān)一的熒光,在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片。它的作用有二:一是吸收和阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡、以免于擾熒光和損傷眼睛,二是選擇并讓特異的熒光透過(guò),表現(xiàn)出專(zhuān)一的熒光色彩。兩種濾光片必須選擇配合使用。
熒光顯微鏡就其光路來(lái)分有兩種:
1.透射式熒光顯微鏡: 激發(fā)光源是通過(guò)聚光鏡穿過(guò)標(biāo)本材料來(lái)激發(fā)熒光的。常用暗視野集光器,也可用普通集光器,調(diào)節(jié)反光鏡使激發(fā)光轉(zhuǎn)射和旁射到標(biāo)本上.這是比較舊式的熒光顯微鏡。其優(yōu)點(diǎn)是低倍鏡時(shí)熒光強(qiáng),而缺點(diǎn)是隨放大倍數(shù)增加其熒光減弱.所以對(duì)觀察較大的標(biāo)本材料較好。
2.落射式熒光顯微鏡這是近代發(fā)展起來(lái)的新式熒光顯微鏡,與上不同處是激發(fā)光從物鏡向下落射到標(biāo)本表面,即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個(gè)雙色束分離器,它與光鈾呈45。角,激發(fā)光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時(shí)進(jìn)入物鏡,反回到雙色束分離器,使激發(fā)光和熒光分開(kāi),殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿(mǎn)足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數(shù)愈大熒光愈強(qiáng)。
 (二)[url=http://www.shkon.cn/produce/fluoro/DFM55D.htm]熒光顯微鏡使用方法[/url].
1.打開(kāi)燈源,超高壓汞燈要預(yù)熱幾分鐘才能達(dá)到zui亮點(diǎn)。  
 2.透射式熒光顯微鏡需在燈源與聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片,在物鏡的后面裝上相應(yīng)的阻斷濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的插塊。  
 3.用低倍鏡觀察,根據(jù)不同型號(hào)熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置,調(diào)整光源中心,使其位于整個(gè)照明光斑的*。  
 4.放置標(biāo)本片,調(diào)焦后即可觀察。 使用中應(yīng)注意:末裝濾光片不要用眼直接觀察,以免引起眼的損傷;用油鏡觀察標(biāo)本時(shí),必須用無(wú)熒光的特殊油鏡;高壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開(kāi),需經(jīng)5分鐘后才能再啟動(dòng),否則會(huì)不穩(wěn)定,影響汞燈壽命。
(三)觀察  在示教臺(tái)上的熒光顯微鏡下用藍(lán)紫光濾光片,可見(jiàn)經(jīng)o.01%的丫啶橙熒光染料染色的細(xì)胞,細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。 
              
              
                 
                

        
        
                    

  
                           
 




 
光學(xué)顯微鏡下材料顯微結(jié)構(gòu)的觀察(金屬、陶瓷材料、聚合物的顯微觀察)


一、目的要求
    1.觀察不同材料在顯微鏡下的微觀形態(tài),通過(guò)本實(shí)驗(yàn)了解鐵碳合金在平衡狀態(tài)下的顯微組織;認(rèn)識(shí)和掌握對(duì)陶瓷材料進(jìn)行相分分析和相量測(cè)定的方法;了解和觀察高分子球晶的結(jié)構(gòu)和形態(tài)
    2.掌握光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)和使用方法 
              
二、基本原理
1.鐵碳合金在平衡狀態(tài)下的顯微組織觀察http://www.shkon.com.cn/produce/metalmicro/DMM700C.htm
    根據(jù)組織特點(diǎn)和含碳量的不同鐵碳合金可分為工業(yè)純鐵、鋼、鑄鐵三大類(lèi)。工業(yè)純鐵含碳小于0.0218%C,碳含量小于2.11%的鐵碳合金稱(chēng)為鋼,碳含量大于2.11%的合金稱(chēng)為鑄鐵。
    碳鋼和白口鑄鐵在室溫下的組織均是由鐵素體(F)和滲碳體(Fe3C)這兩個(gè)基本相所組成,只是因含碳量不同鐵素體和滲碳體的相對(duì)數(shù)量、析出條件以及分布情況有所不同,因而呈現(xiàn)各種不同的組織形態(tài)。
鐵素體是碳在α鐵中的固溶體,常用符號(hào)“ F ”表示。鐵素體組織為等軸晶粒,晶體結(jié)構(gòu)為體心立方晶格。
滲碳體是鐵與碳形成的一種化合物,常用符號(hào)“ Fe3C ”表示。按成分和形成條件不同,滲碳體可呈現(xiàn)不同形態(tài)。
    珠光體是鐵素體與滲碳體的機(jī)械混合物,常用符號(hào)“ P ”表示。在一般退火情況下,它是由鐵素體和滲碳體相互混合交替排列形成的層片狀組織。[url=http://www.baikon.com/index.php?id=128]DMM-330C透反射金相顯微鏡[/url]
    純金屬與單相合金的浸蝕是一個(gè)化學(xué)溶解過(guò)程,當(dāng)把拋光后的試樣與浸蝕劑接觸時(shí),首先拋光面上的形變擾動(dòng)層被溶解掉,這時(shí)鋼的顯微組織沒(méi)有任何的顯露,緊接著是對(duì)晶界的化學(xué)溶解作用,在晶界上原子排列的規(guī)律性比較差,因而快速地被腐蝕掉形成凹溝,這時(shí)合金顯示出多邊形晶粒。若浸蝕繼續(xù)進(jìn)行則浸蝕劑將對(duì)晶粒本身起溶解作用,由于每個(gè)晶粒溶解的速度并不一致,浸蝕以后每顆晶粒都將按照原子排列zui密的面露出表面,在垂直光線的照射下將顯示出明暗不一的晶粒。
    兩相合金的浸蝕主要是電化學(xué)浸蝕過(guò)程。不同的相由于成分、結(jié)構(gòu)的不同,具有不同的電極電位,在浸蝕液中形成了許多對(duì)微小的局部電池,鐵素體具有較高的電極電位為陽(yáng)極,浸蝕時(shí)發(fā)生溶解變得低洼粗糙,滲碳體具有正電位為陰極基本不受浸蝕。鐵素體在光鏡下呈暗黑色,滲碳體呈白亮色。
2.陶瓷材料相分和相量分析[url=http://www.baikon.com/index.php?id=287]XPF-330C偏反光顯微鏡[/url]
    在顯微鏡下觀察陶瓷試樣通??梢砸?jiàn)到三個(gè)不同的相分,即晶相、玻璃相和氣相。
   晶相是由晶體物質(zhì)所構(gòu)成,它的形狀是比較規(guī)則的多邊形,也可能是接近于圓形、長(zhǎng)條狀、針狀以及樹(shù)枝狀等。這些情況除了和該晶體物質(zhì)內(nèi)部構(gòu)成、晶體生長(zhǎng)和雜質(zhì)的摻入有關(guān)外,還和材料制造過(guò)程有關(guān)。晶相一般分主晶相和次晶相,主晶相是陶瓷材料的主體,它可以由單相多晶組成,也可以由多相多晶組成;次晶相的生成一般在晶粒內(nèi)部或邊界上析出,也可能在玻璃相中出現(xiàn),常見(jiàn)的有針狀、柱狀、片狀、球狀等。http://www.shkon.com.cn/produce/polorize/XPF330C.htm
玻璃相為無(wú)定形體,在偏、反光顯微鏡下觀察時(shí)呈現(xiàn)灰黑色,分布在晶粒的周?chē)蔬B續(xù)狀或孤島狀,它在瓷體中起著結(jié)合強(qiáng)固的作用。
    氣相在陶瓷結(jié)構(gòu)中常見(jiàn),它在很大程度上取決于揮發(fā)性雜質(zhì)或結(jié)合劑等的含量、成型、燒成和熱處理工藝。它的形狀大小、分布及含量直接影響陶瓷的各種性能。在鏡下觀察氣相時(shí),都呈現(xiàn)黑色的孔洞,磨成光片不經(jīng)腐蝕也能看到,這是由于空洞不反光的緣故。氣孔的形狀各異,有圓形、橢圓形、蠕蟲(chóng)狀等,氣孔有時(shí)包裹在晶體內(nèi)部。
    陶瓷結(jié)構(gòu)中的粒徑、平均粒度及粒徑分布也是表征顯微結(jié)構(gòu)特征的重要參數(shù),其大小和均勻程度會(huì)直接影響諸多物理性能,如材料的強(qiáng)度、韌性、硬度、導(dǎo)熱、導(dǎo)電、介電、敏感、腐蝕、催化、摩擦磨損、光的吸收與反射等都與粒徑及分布特性密切相關(guān)。
3.聚合物球晶的觀察[url=http://www.shkon.com/produce/polorize/XPR500C.htm]偏光熔點(diǎn)儀[/url]
    晶體和無(wú)定形體是聚合物聚集態(tài)的兩種基本形式,很多聚合物都能結(jié)晶。聚合物晶體從形態(tài)上看有單晶、球晶、纖維晶、串晶、須晶等。在片狀單晶體中分子鏈垂直于晶體表面,在纖維晶和須晶中,分子鏈沿纖維軸方向排列。聚合物從熔融狀態(tài)冷卻時(shí)主要生成球晶,它是聚合物晶體的主要形式,對(duì)制品性能有很大影響。www.shkon.com.cn蔡康偏光顯微鏡
    球晶是以晶核為中心成放射狀增長(zhǎng)構(gòu)成球形而得名,是“三維結(jié)構(gòu)”。但在極薄的試片中也可以近似的看成是圓盤(pán)形的“二維結(jié)構(gòu)”,球晶是多面體。由分子鏈構(gòu)成晶胞,晶胞的堆積構(gòu)成晶片,晶片迭合構(gòu)成微纖束,微纖束沿半徑方向增長(zhǎng)構(gòu)成球晶。晶片間存在著結(jié)晶缺陷,微纖束之間存在著無(wú)定形夾雜物。球晶的大小取決于聚合物的分子結(jié)構(gòu)及結(jié)晶條件,因此隨著聚合物種類(lèi)和結(jié)晶條件的不同,球晶尺寸差別很大,直徑可以從微米級(jí)到毫米級(jí),甚至可以大到厘米。球晶分散在無(wú)定形聚合物中,一般說(shuō)來(lái)無(wú)定形是連續(xù)相,球晶的周邊可以相交,成為不規(guī)則的多邊形。球晶具有光學(xué)各向異性,對(duì)光線有折射作用,因此能夠用偏光顯微鏡進(jìn)行觀察。另外還可以觀察到黑十字消光圖象。有些聚合物生成球晶時(shí),晶片沿半徑增長(zhǎng)時(shí)可以進(jìn)行螺旋性扭曲,因此還能在偏光顯微鏡下看到同心圓消光圖象http://www.shkon.com.cn/produce/polorize.htm晶體用偏光顯微鏡
三、儀器和樣品
    金相顯微鏡、偏光顯微鏡、工業(yè)純鐵、40鋼、T8鋼、亞共晶白口鐵、聚丙烯球晶樣品、SrTiO3壓敏陶瓷、BaTiO3電介質(zhì)瓷樣品。www.shkon.com.cn偏反光顯微鏡,透反射顯微鏡
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 金屬材料的平衡組織觀察
    觀察的典型鐵碳合金為工業(yè)純鐵、40鋼、T8鋼、亞共晶白口鐵。用金相顯微境行觀察并比較各種典型合金的組織特征。
    繪出實(shí)驗(yàn)所觀察到的試樣組織圖,在圖中標(biāo)明各組織組成物的名稱(chēng),并比較其組織特征。
2.陶瓷材料的粒度測(cè)定
    (1)晶體粒徑的測(cè)量
    測(cè)量時(shí)通常使用有刻度尺的目鏡進(jìn)行。目鏡的十字絲上刻有100個(gè)小格(刻度尺),每一小格所代表的長(zhǎng)度因放大倍數(shù)不同而不同。目鏡刻度尺每格所代表的長(zhǎng)度是利用載物臺(tái)測(cè)微尺來(lái)標(biāo)定的,載物臺(tái)測(cè)微尺嵌于玻片上(或是金屬板上),長(zhǎng)1mm,分為100小格,每一小格為0.01 mm。
    ①測(cè)量原理:首先根據(jù)載物臺(tái)測(cè)微尺,對(duì)一定的放大系統(tǒng)求出目鏡刻度尺每一刻度的代表值,然后再用目鏡刻度尺直接測(cè)量晶粒的粒度。
    ②測(cè)量方法:
    首*行目鏡刻度尺標(biāo)定。取“10×”目鏡(附有刻度尺),將載物臺(tái)測(cè)微尺置于載物臺(tái)上進(jìn)行準(zhǔn)焦,使視域內(nèi)同時(shí)見(jiàn)到兩個(gè)顯微尺。將兩顯微尺平行并移動(dòng)載物臺(tái)測(cè)微尺使兩尺零點(diǎn)對(duì)齊,然后仔細(xì)觀察兩尺上分格線再次重合的地方,數(shù)出這一段長(zhǎng)度中二尺各有的刻度數(shù)。例如目鏡刻度尺56小格,載物臺(tái)測(cè)微尺刻度為70小格,即目鏡刻度尺56小格相對(duì)于載物臺(tái)測(cè)微尺的70小格,于是目鏡刻度尺每小格所代表的長(zhǎng)度為:
 
    目鏡刻度尺代表實(shí)際長(zhǎng)度值求得后,就可以測(cè)定晶粒(或氣孔)的平均大小了。即將欲測(cè)試樣的晶粒(或氣孔)移至目鏡刻度尺上,讀出欲測(cè)晶粒(或氣孔)所占目鏡刻度尺的格數(shù)就可以算出晶粒(或氣孔)的實(shí)際尺寸。比如某一晶粒占據(jù)目鏡刻度尺4格,則該晶粒的實(shí)際尺寸為12.5μm×4 = 50μm。
對(duì)多個(gè)晶粒(或氣孔)進(jìn)行測(cè)量,求其平均值,即為某種相分的晶粒(或氣孔)的平均粒徑值。對(duì)于等徑的晶粒只需測(cè)一個(gè)方向,對(duì)于非等徑的晶粒如長(zhǎng)條狀、柱狀、針狀等則必須分別求出其長(zhǎng)短方向的尺寸,然后再求其平均值。
3. 偏光顯微鏡下聚合物球晶的觀察
    將壓片機(jī)升至240℃;放上蓋玻片,再放上少量聚丙烯樣品,待樣品熔化后再蓋上一片蓋玻片,壓制約一分鐘,制成試片。打開(kāi)上蓋,使其緩慢自然降至室溫,可制成較大的球晶。
偏光顯微鏡在使用前首先要對(duì)光,此時(shí)可裝上低倍物鏡和目鏡,推出起偏片(起偏器),轉(zhuǎn)動(dòng)視場(chǎng)光闌,使    在目鏡中看到的視域?yàn)閦ui亮,再推進(jìn)起偏片,使得在兩個(gè)偏振片正交時(shí)目鏡的視域zui暗。其次是對(duì)焦,將制好的試片置于載物臺(tái)觀察,并慢慢提升鏡筒,直至看到物象后,再轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)手輪,使物象達(dá)到zui清楚為止。此時(shí)偏光顯微鏡即處于可用狀態(tài)。用畢后,按取用時(shí)狀態(tài)放好。
    把偏光顯微鏡調(diào)到可用狀態(tài)后,將聚丙烯試片放在載物臺(tái)上觀察球晶形狀,并測(cè)量聚丙烯球晶直徑

   

    
 
醫(yī)學(xué)和生物學(xué)常使用的各種顯微鏡

  暗視野顯微鏡  在普通光學(xué)顯微鏡臺(tái)下配一個(gè)暗視野聚光器(圖4),來(lái)自下面光源的光線被拋物面聚光器反射,形成了橫過(guò)顯微鏡視野而不進(jìn)入物鏡的強(qiáng)烈光束,因此視野是暗的,視野中直徑大于 0.3μm的微粒將光線散射,其大小和形態(tài)可清楚看到。甚至可看到普通明視野顯微鏡中看不見(jiàn)的幾個(gè)毫微米的微粒。因此在某些細(xì)菌、細(xì)胞等活體檢查中常常使用。
  實(shí)體顯微鏡  由雙筒目鏡和物鏡構(gòu)成。放大率 7~80倍。利用側(cè)上方或下方顯微鏡燈照明。在目鏡內(nèi)形成一個(gè)直立的放大實(shí)像,可以觀察未經(jīng)加工的物體的立體形狀、顏色及表面微細(xì)結(jié)構(gòu),并能進(jìn)行顯微解剖操作,也可以觀察生物機(jī)體的組織切片。
  [url=http://www.shkon.com/produce/fluoro/DFM60C.htm]熒光顯微鏡  在短波長(zhǎng)光波(紫外光或紫藍(lán)色光,波長(zhǎng)250~400nm)照射下,某些物質(zhì)吸收光能,受到激發(fā)并釋放出一種能量降級(jí)的較長(zhǎng)的光波(藍(lán)、綠、黃或紅光,波長(zhǎng)400~800nm),這種光稱(chēng)熒光[/url]  。某種物質(zhì)在短光波照射下即可發(fā)生熒光,如組織內(nèi)大部分脂質(zhì)和蛋白質(zhì)經(jīng)照射均可發(fā)出淡藍(lán)色熒光,稱(chēng)為自發(fā)性熒光。但大部分物質(zhì)需要用熒光染料(如吖啶橙、異硫氰酸熒光素等)染色后,在短光波照射下才能發(fā)出熒光。熒光顯微鏡的光源為高壓汞燈,發(fā)出的紫外光源經(jīng)過(guò)激發(fā)濾光片(此濾光片可通過(guò)對(duì)標(biāo)本中熒光物質(zhì)合宜的激發(fā)光)過(guò)濾后射向普勒姆氏分色鏡。分色鏡將激發(fā)光向下反射,通過(guò)物鏡投射向經(jīng)熒光染料染色的標(biāo)本。染料被激發(fā)并釋放出熒光,通過(guò)物鏡,穿過(guò)分色鏡和目鏡即可進(jìn)行觀察。目鏡下方安置有屏障濾片(只允許特定波長(zhǎng)的熒光通過(guò))以保護(hù)眼眼及降低視野暗度(圖4)。
熒光顯微鏡的特點(diǎn)是靈敏度高,在暗視野中低濃度熒光染色即可顯示出標(biāo)本內(nèi)樣品的存在,其對(duì)比約為可見(jiàn)光顯微鏡的 100倍。30年代熒光染色即已用于細(xì)菌、霉菌等微生物及細(xì)胞、纖維等的形態(tài)觀察和研究。如用抗酸菌熒光染色法可幫助在痰中找到結(jié)核桿菌。 40年代創(chuàng)造了熒光染料標(biāo)記蛋白質(zhì)的技術(shù)這種技術(shù)現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于免疫熒光抗體染色的常規(guī)技術(shù)中,可檢查和定位病毒、細(xì)菌、霉菌、原蟲(chóng)、寄生蟲(chóng)及動(dòng)物和人的組織抗原與抗體,可用以探討病因及發(fā)病機(jī)理,如腎小球疾病的分類(lèi)及診斷,乳頭瘤病毒與子宮頸癌的關(guān)系等。 在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究及疾病診斷方面的用途日益廣泛。
  偏光顯微鏡  從光源發(fā)出的光線通過(guò)空氣和普通玻璃時(shí),在與光線垂直的平面內(nèi)的各個(gè)方向以同一振幅進(jìn)行振動(dòng)并迅速向前方傳遞,這是光的波動(dòng)性原理??諝馀c普通玻璃為各向同性體,又稱(chēng)單折射體。[url=http://www.shkon.com/produce/polorize.htm]如果該光源的光通過(guò)一種各向異性體(又稱(chēng)雙折射體)時(shí),會(huì)將一束光線分為各只有一個(gè)振動(dòng)平面的,而且振動(dòng)方向互相垂直的兩束光線。這兩束光線的振動(dòng)方向、速度、折光率和波長(zhǎng)都不相同。[/url]這樣只有一個(gè)振動(dòng)平面的光線稱(chēng)偏振光。偏光顯微鏡即利用這一現(xiàn)象而設(shè)計(jì)。偏光顯微鏡內(nèi),在物鏡與目鏡間插入一個(gè)檢偏鏡片,光源與聚光器間鑲有起偏鏡片,圓形載物臺(tái)可以作360°旋轉(zhuǎn)(圖5)。[url=http://caikon.diytrade.com]起偏與檢偏鏡片處于正交檢偏位時(shí),視野*變黑。將被檢物體放在顯微鏡臺(tái)上。若被檢物為單折射體,則旋轉(zhuǎn)鏡臺(tái),視野始終黑暗。若旋轉(zhuǎn)鏡臺(tái)一周,視野內(nèi)被檢物四明四暗,則說(shuō)明被檢物是雙折射體。許多結(jié)晶物質(zhì)(如痛風(fēng)結(jié)節(jié)中的尿酸鹽結(jié)晶、尿結(jié)石、膽結(jié)石等),人體組織內(nèi)的彈力纖維、膠原纖維、染色體和淀粉樣原纖維等都是雙折射體,可借偏振光顯微鏡術(shù)檢驗(yàn),進(jìn)行定性和定量分析。[/url]
 
  [url=http://www.leikon.com.cn/produce/biology.htm]位相顯微鏡  又稱(chēng)相差顯微鏡或相襯顯微鏡。普通光學(xué)顯微鏡之所以看不見(jiàn)未染色的組織、細(xì)胞和細(xì)菌、病毒等活機(jī)體的圖像,是因?yàn)橥ㄟ^(guò)樣品的光線變化差別(反差)很小。標(biāo)本染色后改變了振幅(亮度)和波長(zhǎng)(顏色),影響了反差而獲得圖像。[/url]但是染色會(huì)引起樣品變形,也可使有生命的機(jī)體 。要觀察不染色的新鮮組織、細(xì)胞或其他微小活體必須使用位相顯微鏡。[url=http://www.shkon.cn/produce/biology/XSP11CD.htm]位相顯微鏡的原理是兩個(gè)光波因位相差而互相干涉,出現(xiàn)光波強(qiáng)弱和反差的改變而成可見(jiàn)影像。點(diǎn)光源發(fā)出的光線可以表現(xiàn)為正弦波圖形(圖6a)。[/url]兩個(gè)波峰間的距離為波長(zhǎng),波的振幅表示光的亮度(振幅大、亮度高)。設(shè)想同一光源發(fā)出的兩條光波,分別同時(shí)通過(guò)空氣及某種透明介質(zhì)。在通過(guò)一定厚度的某種透明介質(zhì)時(shí),光波的速度就會(huì)降低,但是光的亮度未變。光波在通過(guò)該透明介質(zhì)后比一直在空氣中前進(jìn)的另一條光波遲滯了波長(zhǎng),因而兩條光波出現(xiàn)了位相的變化(位相差)。但人眼不能分辨這兩條平行光線的位相差。如果這兩條光波射到光屏的同一點(diǎn)上,而且一條光波比另一條光波遲滯了半個(gè)波長(zhǎng),即兩條光波因位相相反而互相干涉抵消則光線消失,或者相對(duì)振幅相互影響而光線減弱。如果一條光波雖然遲滯了一個(gè)波長(zhǎng),但兩條光波位相相同,則因波的疊加而光線增強(qiáng)。
 
  [url=http://www.leikon.com.cn/produce/biology/XSP13CC.htm]位相顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)與普通光學(xué)顯微鏡相同。不同之處在于:①物鏡鏡頭上面,在物鏡第二焦平面裝有一塊圓盤(pán)狀的位相板(圖6b)。[/url]②聚光器下面,在聚光器*焦平面裝有環(huán)形光束,光束上刻有狹窄的縫隙可通過(guò)環(huán)形強(qiáng)光(圖6c)。如圖6d所示,環(huán)形光束 A點(diǎn)發(fā)出的光線經(jīng)過(guò)聚光器后成為平行光線。光線通過(guò)載物臺(tái)上的樣品時(shí),因樣品內(nèi)各個(gè)質(zhì)點(diǎn)(如b點(diǎn))的折射率不同而受到干涉,發(fā)生衍射,即分為未偏向波(實(shí)線)和偏向波(虛線)。未偏向波通過(guò)物鏡聚焦于位相板 A' 點(diǎn)上成像,然后通過(guò)位相板,均勻地分布在標(biāo)本像平面上成為背景。偏向波通過(guò)物鏡后從位相板 A'點(diǎn)周?chē)ㄟ^(guò)位相板同樣聚焦在像平面的B'上。換句話說(shuō),未偏向波和偏向波是分別通過(guò)位相板的不同部位。在位相板上不同的區(qū)域涂有不同的涂層,可以分別改變未偏向波或偏向波的速度和亮度,由此兩種光波出現(xiàn)了位相差,差了半個(gè)波長(zhǎng)或一個(gè)波長(zhǎng),它們?cè)谙衿矫娴暮喜ň统霈F(xiàn)明暗對(duì)比,樣品內(nèi)的各個(gè)細(xì)節(jié)也就能看得見(jiàn)。
  總之,[url=http://www.leikon.cn/produce/biology/XSP11CC.htm]位相顯微鏡是利用樣品中質(zhì)點(diǎn)折射率的不同或質(zhì)點(diǎn)厚度的不等,產(chǎn)生光線的相位差,使新鮮標(biāo)本不必染色就可以看到,而且能夠觀察到活細(xì)胞內(nèi)線粒體及染色體等精細(xì)結(jié)構(gòu),還可以應(yīng)用于霉菌、細(xì)菌、病毒等更微小活體的研究,進(jìn)行標(biāo)本形態(tài)、數(shù)量、活動(dòng)及分裂、繁殖等生物學(xué)行為觀察,并可進(jìn)行量度與比較。 [/url]位相顯微鏡是利用樣品中質(zhì)點(diǎn)折射率的不同或質(zhì)點(diǎn)厚度的不等,產(chǎn)生光線的相位差,使新鮮標(biāo)本不必染色就可以看到,而且能夠觀察到活細(xì)胞內(nèi)線粒體及染色體等精細(xì)結(jié)構(gòu),還可以應(yīng)用于霉菌、細(xì)菌、病毒等更微小活體的研究,進(jìn)行標(biāo)本形態(tài)、數(shù)量、活動(dòng)及分裂、繁殖等生物學(xué)行為觀察,并可進(jìn)行量度與比較。
  倒置式顯微鏡  普通顯微鏡鏡的物鏡頭方向向下接近標(biāo)本。倒置式顯微鏡的物鏡鏡頭則處于垂直向上的位置,因此目鏡和鏡筒的縱軸與物鏡的縱軸呈45度角。[/url]倒置式顯微鏡  普通顯微鏡鏡的物鏡頭方向向下接近標(biāo)本。倒置式顯微鏡的物鏡鏡頭則處于垂直向上的位置,因此目鏡和鏡筒的縱軸與物鏡的縱軸呈45度角。載物臺(tái)面積較大,在物鏡上方,載物臺(tái)上方有一個(gè)長(zhǎng)焦距聚光器和照明光源。物鏡和聚光器可裝配位相顯微鏡的附件。放大率16~80倍。組織培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿可以直接放在載物臺(tái)上,進(jìn)行不染色新鮮標(biāo)本及活體、細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量和動(dòng)態(tài)觀察??蛇M(jìn)行多孔微量生物化學(xué)及免疫反應(yīng)平板的結(jié)果觀察。倒置式顯微鏡可換用普通亮視野光學(xué)鏡頭;可裝配偏振光、微分干涉差、熒光附件進(jìn)行觀察。
  微分干涉差顯微鏡(DIC)  又稱(chēng)干擾或干涉顯微鏡。能看到和測(cè)定微小的位相變化,與位相顯微鏡相似,使無(wú)色透明的標(biāo)本具有明暗和顏色的變化,從而增強(qiáng)反差。在普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)上安裝偏光和干涉部件,以及360°旋轉(zhuǎn)載物臺(tái)。它又利用偏振光的干涉原理。如圖7所示,在光源上方安置有起偏鏡片和光束分解棱鏡。從起偏鏡片出來(lái)的直線偏振光通過(guò)光束分解棱鏡后,分成互相垂直振動(dòng)的兩條直線偏振光。兩條光線經(jīng)聚光器折射后射向樣品。因樣品內(nèi)各個(gè)質(zhì)點(diǎn)的折射射率不同,部分光波的位相改變及因干涉而發(fā)生橫向偏移。兩條光線通過(guò)物鏡后經(jīng)第二組光束分解棱鏡相合并,由檢偏鏡發(fā)生干涉。終末像的每一個(gè)點(diǎn)是由物體上同一點(diǎn)的兩個(gè)互相重疊的不同圖像構(gòu)成的一種混合像,從而使肉眼得以辨識(shí)。 
 微分干涉差顯微鏡同樣可以觀察到在普通亮視野中看不見(jiàn)的無(wú)色透明物體,可以觀察細(xì)胞、細(xì)菌等活體,而且影像呈立體感,較位相顯微鏡的影像更細(xì)致、更逼真??捎盟鼘?duì)活細(xì)胞的各個(gè)部位作更精細(xì)的研究。如果用白光照明,不同位相表現(xiàn)為各種顏色,轉(zhuǎn)動(dòng)載物臺(tái),顏色會(huì)發(fā)生變化。單色光照明產(chǎn)生明暗反差,各種成分呈現(xiàn)不同的對(duì)比度。微分干涉差顯微鏡又可以作為一種高度精密的超微量光學(xué)天平來(lái)使用,用以估測(cè)的干物體的質(zhì)量可以小到 1×-14克。當(dāng)細(xì)胞中所含固體物質(zhì)的濃度增加百分之一時(shí),其折射率相應(yīng)增加0.0018。細(xì)胞各相成分的折射率可以根據(jù)它與相關(guān)區(qū)域(懸浮液區(qū))間位種的不同而估計(jì),從而可進(jìn)一步算出一個(gè)細(xì)胞中某些成分的干燥重量。
  
 

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