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雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類藥物殘留的檢測(cè)解決方案

來(lái)源:迪馬科技   2019年06月13日 09:42  

        氯霉素是一種抑菌性廣譜抗生素,常被用于畜禽動(dòng)物及水產(chǎn)品的疾病治療和預(yù)防;甲硝唑?yàn)橄趸溥蝾愃幬铮1患尤雱?dòng)物飼料中以驅(qū)除動(dòng)物體內(nèi)的寄生蟲,因而造成動(dòng)物源性食品中的藥物殘留。我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告中已將甲硝唑和氯霉素列為不得檢出藥物,并規(guī)定了其他藥物的殘留*。
       目前檢測(cè)甲硝唑、氯霉素類藥物方法很多,但由于甲硝唑、氟苯尼考胺和氯霉素的性質(zhì)差異比較大,同時(shí)檢測(cè)的方法很少。迪馬科技在參考各種標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)基礎(chǔ)上,建立了SPE-UPLC -MS/MS法測(cè)定雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類獸藥殘留,采用90% 乙腈水提取,ProElut DPC-2固相萃取柱凈化樣品,收集流出液,Leapsil C18色譜柱分離檢測(cè)。方法特點(diǎn)如下:
1)前處理步驟少,提取液直接通過(guò)凈化柱接收流出液即可;
2)有機(jī)溶劑消耗量小,前處理過(guò)程中也無(wú)需使用酸堿試劑;
3)使用ProElut DPC-2凈化柱能夠有效的除掉雜質(zhì),凈化效果優(yōu)異;
4)分析條件簡(jiǎn)單,可以一個(gè)流動(dòng)相正負(fù)離子同時(shí)檢測(cè),大大提高工作效率,減少實(shí)驗(yàn)成本;
5)方法定量限是0.5 μg/kg。
以下為詳細(xì)解決方案,敬請(qǐng)參考!

雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類藥物殘留的檢測(cè)SPE-UPLC-MS/MS法

1、適用范圍
本方案適用于雞肉和雞蛋中甲硝唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢測(cè)。

2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1) 單標(biāo)儲(chǔ)備液1.0 μg/mL:準(zhǔn)確稱取適量各標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇配制成1.0 μg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液;
(2) 混標(biāo)儲(chǔ)備液200 μg/L:分別吸取各單標(biāo)儲(chǔ)備液,用乙腈配制成200 μg/L混標(biāo)儲(chǔ)備液;
(3) 混標(biāo)中間液20 μg/L:準(zhǔn)確吸取適量混標(biāo)儲(chǔ)備液200 μg/L,用乙腈配制成20 μg/L的混標(biāo)中間液

3、提取

(1) 取5.0 g樣品,加入20 mL 90% 乙腈水溶液,振蕩5 min,超聲5 min,6000 rpm離心
2 min,取出上清液;
(2) 向上清液中加入10 mL乙腈飽和正己烷溶液,振蕩2 min,6000 rpm離心2 min,取下層清液約10 mL,待凈化。(雞蛋樣品加入正己烷后離心后可能會(huì)有果凍層,可以先將澄清的正己烷層吸去,然后混勻再離心)

4、凈化—— ProElut DPC-2 12 mL (Cat#: 65940)

小柱不需要活化,取10 mL待凈化液加入柱中,接收8 mL流出液;將接收的流出液在40 ℃水浴條件下氮吹至1 mL以下即可,用水定容至1 mL,過(guò)微孔濾膜(Nylon)上機(jī)分析。
注:同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5、分析條件

UPLC 條件
色譜柱:Leapsil C18, 100 x 2.1 mm, 2.7 μm (Cat#:86005)
流  速:0.3 mL/min   
進(jìn)樣量:10 μL  
柱  溫:40 ℃
流動(dòng)相:A: 10 mmol/L乙酸銨       B: 乙腈

梯度設(shè)置

時(shí)間/Min.02677.513
A (%)909025109090
B (%)101075901010

 

 

 

質(zhì)譜條件

電離模式:ESI                                    掃描方式:正/負(fù)離子掃描
檢測(cè)方式:                                         多反應(yīng)監(jiān)測(cè) 電噴霧電壓:5500 V/-4500 V
霧化氣壓力:50 psi                            輔助氣壓力:50 psi
氣簾氣壓力:20 psi                            離子源溫度:500 ℃

 

定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

藥物名稱

定性離子對(duì)

(m/z)

(母離子/子離子)

定量離子對(duì)

(m/z)

(母離子/子離子)

碰撞氣能量/eV

去簇電壓/V

甲硝唑

172.0/127.8

172.0/127.8

20

50

172.0/81.9

32

氟苯尼考胺

247.9/230.0

247.9/230.0

15

72

247.9/130.1

28

氯霉素

321.0/151.8

321.0/151.8

-24

-80

321.0/256.9

-15

甲砜霉素

354.0/184.8

354.0/184.8

-26

-80

354.0/289.8

-16

氟苯尼考

355.8/335.9

355.8/335.9

-13

-70

6、添加回收結(jié)果

雞蛋中甲硝唑和氯霉素類檢測(cè)的添加回收結(jié)果(%)

 

雞肉中甲硝唑和氯霉素類檢測(cè)的添加回收結(jié)果(%)

 

雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5 種獸藥檢測(cè)基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品1.0 μg/L 的XIC 圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考)

添加水平為0.5 μg/kg雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測(cè)的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考)

雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測(cè)基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品10.0 μg/L的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考)

 

添加水平為5.0 μg/kg雞蛋中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測(cè)的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考)

 

雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測(cè)基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品1.0 μg/L的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考)

添加水平為0.5 μg/kg雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測(cè)的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考)

 

雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測(cè)基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品10.0 μg/L的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考)

 

添加水平為5.0 μg/kg雞肉中甲硝唑和氯霉素類5種獸藥檢測(cè)的XIC圖
(從左到右,從上到下依次是:甲硝唑、氟苯尼考胺、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考)

 

雞肉和雞蛋中甲硝唑和氯霉素類藥物殘留的檢測(cè)相關(guān)產(chǎn)品信息:

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

樣品前處理

65940

食品中獸藥檢測(cè)柱 ProElut DPC-2

12 mL, 20/pk

244358

12管防交叉污染真空SPE萃取裝置

12位

4806

考克(控制流量)

15/pk

99011

真空/正壓兩用泵,無(wú)油

1/pk

99013

抽濾瓶套裝

(包括硅橡膠管2米, 2 L抽濾瓶及橡膠塞)

1/pk

37177

ProMax針頭式過(guò)濾器Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

標(biāo)準(zhǔn)品

50P-C15201000

甲硝唑[443-48-1]

250 mg

50D-OP079-10

氟苯尼考胺[76639-93-5]

10 mg

50P-C11120000

氯霉素[56-75-7]

250 mg

50D-223121

氟苯尼考[76639-94-6]

250 mg, 98.5%

50P-C17457000

甲砜霉素[15318-45-3]

100 mg

色譜柱及保護(hù)柱

86005

UHPLC/HPLC兼容色譜柱 Leapsil C18

100 x 2.1 mm, 2.7 μm

HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對(duì)試劑

50101

乙腈 HPLC級(jí)

4 L

50102

甲醇 HPLC級(jí)

4 L

50115

正己烷  HPLC級(jí)

4 L

50138

乙酸銨 HPLC級(jí)

100 g

通用色譜產(chǎn)品

52401B

瓶架/藍(lán)色(現(xiàn)貨)

50孔

52401A

瓶架/白色(現(xiàn)貨)

50孔

5321

螺紋口進(jìn)樣瓶, 透明帶刻度和書寫

2 mL, 100/pk

5324

樣品瓶蓋/含墊 (白色PTFE/紅色橡膠隔墊)

100/pk

H80465

HPLC 進(jìn)樣針

25 μL

 

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