同位素標記載體/蛋白類在小鼠等體內(nèi)分布實驗外包服務(wù)

西安瑞禧生物科技有限公司可以提供同位素標記的蛋白類或者納米載體或相關(guān)介質(zhì)的的代動力學實驗外包服務(wù)，我們可以提供關(guān)于在體內(nèi)的吸收、分布、、排泄試驗等等數(shù)據(jù)。

針對于目前的生物技術(shù)類在嚙齒類中的代動力學研究中，通常利用同位素示蹤技術(shù)研究其在體內(nèi)的吸收、分布、、排泄試驗等，從而獲得該在嚙齒類體內(nèi)的代動力學參數(shù)、分布特征，及排泄特征等。下面根據(jù)利用同位素示蹤技術(shù)研究的代動力學的內(nèi)容介紹核學應(yīng)用研究室所具備的條件和需要之處。

1. ¹²⁵I 同位素標記技術(shù)

主要利用Iodogen 法或氯胺-T法將¹²⁵I 標記到目標蛋白上，標記過程嚴格按照所用的標記方法進行操作。于98%的蛋白類，且不含賦形劑或穩(wěn)定劑，基本全部能夠標記。

標記之后的標記物會利用放射性薄層掃描儀或放射性HPLC對標記物進行標記率的測定，然后利用分子篩凝膠色譜對標記物進行分離純化，收集的分離液體分別進行放射性cpm計數(shù)和蛋白濃度的測定。終收集放射性計數(shù)和蛋白濃度的分離液體，并利用放射性薄層掃描儀或放射性HPLC對其進行放化純度鑒定，要求放化于96%方可進行后續(xù)代特性的研究。

2. 三氯醋酸（TCA）沉淀法測定¹²⁵I-受試含量的方法學確證

    取正常SD大鼠血清、心、、脾、、腎、胸腺、脂肪、肌肉、腸內(nèi)容物和尿等12種器官/組織或體液及緩沖液。制成勻漿，加入3-5個不同蛋白含量的放射性¹²⁵I-受試，樣本混勻后，加入等量20 %TCA沉淀蛋白，測定組織總放射性；離心后吸出上清，g計數(shù)儀測定上清中g放射性。利用所獲得的數(shù)據(jù)建立不同組織的蛋白濃度-放射性計數(shù)的標準曲線，并進行其方法學驗證（主要包括方法的特異性、靈敏度、線性和精密度、回收率等）。

3. 濃度-時間曲線

實驗所需的SD 大鼠、Balb/c 小鼠等購買于北京維通利華，能夠提供實驗的合格證。核學應(yīng)用研究室具有專一的飼養(yǎng)室，飼養(yǎng)為IVC獨立送風，小鼠飼養(yǎng)區(qū)有56籠，大鼠飼養(yǎng)區(qū)25籠，飼養(yǎng)和空間能夠滿足少2個代同時進行且互不干擾。

非代動力學研究技術(shù)指導原則（稿）中指出，以血濃度-時間曲線的每個采樣點一般不少于6個數(shù)據(jù)為限計算所需數(shù)。建議受試采用雌雄各半。我們會根據(jù)指導原則中的要求進行采樣時間的設(shè)定，為采樣點，我們會在正式試驗前進行預試驗，然后根據(jù)預試驗的結(jié)果，審核并修正原設(shè)計的采樣點。的注射和熟練的采血技術(shù)能夠滿足此項實驗順利進行。取血后離心取血清，血清加入等量20 %TCA沉淀蛋白，測定總γ放射性；離心后分別測定沉淀部分和上清部分的γ放射性。濃度以當量濃度（ng Equ·mL^-1）表示。根據(jù)試驗中測得的各受試的血濃度-時間數(shù)據(jù)，求得主要代動力學參數(shù)。靜脈注射，應(yīng)提供t1/2（半衰期）、Vd（表觀分布容積）、AUC（血濃度-時間曲線下面積）、CL（率）等參數(shù)值；外，應(yīng)提供Cmax和Tmax（達峰時間）、 t1/2（半衰期）等參數(shù)。

4. 組織分布

我們會根據(jù)非代動力學研究技術(shù)指導原則（稿）和所獲得的血濃度-時間曲線數(shù)據(jù)選取3-4個時間點分別代表吸收相、平衡相和相的分布。每個時間點6只實驗，雌性各半，在盡可能的將體內(nèi)全部放出后，分別取出取胸腺、心臟、臟、、脾臟、腎上腺、、膀胱、生殖腺、腸淋巴結(jié)、腸內(nèi)容物、空腸、脂肪、肌肉、骨髓、腦、血清和尿液等組織，稱重后將組織勻漿、TCA沉淀、離心后分別測定上清和沉淀內(nèi)放射性計數(shù)。以ng Equ·g^-1鮮濕重或ng Equ·mL^-1體積表示放射性濃度。

5. 糞尿排泄試驗

將放入籠內(nèi)，選定一個劑量后，按一定的時間間隔分段收集尿或糞的全部樣品，測定濃度。糞樣品收集后按一定比例制成勻漿，記錄總體積，取部分樣品進行含量測定。計算經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量，直收集到的樣品測定不到為止。每個時間點少有5只的試驗數(shù)據(jù)。

6. 膽汁排泄試驗

     6只SD大鼠 (雄3只，雌3只，體重200 ± 20g) ，用戊巴比妥那麻醉，切開腹腔，分離膽總管，遠端結(jié)扎，近端插入引流管引流膽汁，注射后收集膽汁，測定γ放射性，計算排出放射性占注入放射性量的百分數(shù)。

    擬開展大鼠在膽汁插管后，清醒狀態(tài)下收集膽汁，目前正在聯(lián)系相關(guān)實驗技術(shù)人員。

7. 血漿蛋白結(jié)合試驗

取正常大鼠血漿，每管200 mL，分別加入不同濃度的¹²⁵I-受試。4°C 過夜或37°C水浴5 min后，取血漿直接放射性薄層層析或于放射性HPLC進樣。利用放射性薄層掃描或者連接有放射性檢測器的HPLC 直接檢測，并利用儀器所帶有的軟件處理放射性色譜圖。

基于原有的U-3000 HPLC和連接的放射性檢測器，目前正在購買TSK-3000 蛋白柱并進行試驗，如果能夠試驗，血漿蛋白結(jié)合試驗、生物樣品中（、膽汁、尿液）中的原形檢測均能夠檢測。

8. 試驗中所需儀器