原代培養(yǎng)經(jīng)驗分享

來源：上海北諾生物科技有限公司 2017年08月02日 10:56

經(jīng)驗分享：

1.原代細(xì)胞鋪満瓶底后棄原液，PBS沖洗2次。

2.加入0.25%Trypsin-0.02%EDTA,量覆蓋瓶底即可，室溫作用，鏡下觀察至組織塊周圍的細(xì)胞回縮，立體感增強(qiáng)。

3.棄去消化液，PBS輕漂一遍(目的是除去EDTA，它對脆弱的原代細(xì)胞很不好)但不要用力搖晃，以免部分消化稍過的細(xì)胞流失。

4.加入培養(yǎng)液吹打，不要產(chǎn)生氣泡，對細(xì)胞有損。

5.吸出2/3的懸液傳入新瓶。
6.向原瓶中余下的1/3細(xì)胞懸液中補(bǔ)加2/3的新培養(yǎng)液，與未消化的組織塊繼續(xù)培養(yǎng)。

7. 24小時內(nèi)新的細(xì)胞又從組織塊中爬出啦，等鋪滿后再如上所述做一次吧。

注：

1.只有當(dāng)原代培養(yǎng)時組織塊較多時才這樣做，否則得不償失。

2.保留1/3的細(xì)胞是為了讓余下的組織塊在細(xì)胞間作用下迅速健康的生長。

3.一瓶細(xì)胞以此法處理不要超過3次。

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