ELISA試劑盒是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技能以后開展起來的一種免疫酶技能。此項(xiàng)技能自70年代初面世以來，開展十分迅速，現(xiàn)在已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的很多范疇。
（一） 原理
ELISA是以免疫學(xué)反響為根底，將抗原、牽9體的特異性反響與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技能。因?yàn)榭乖?、抗體的反響在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每參加一種試劑孵育后，可通過洗刷除掉剩余的游離反響物，然后保證實(shí)驗(yàn)成果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)踐使用中，通過不一樣的規(guī)劃，詳細(xì)的辦法過程可有多種。即:用于檢查抗體的間接法、用于檢查抗原的雙抗體夾心法以及用于檢查小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是國產(chǎn)ELISA試劑盒雙抗體夾心法及ELISA間接法。
（二） 操作過程
辦法一 用于檢查不知道抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml，4℃**。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗刷，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃孵育1小時。然后洗刷。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗刷。
4. 加底物液顯色：于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 停止反響：于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. 成果判定：可于白色布景上，直接用肉眼觀察成果：反響孔內(nèi)色彩越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反響為無色或極淺，根據(jù)所呈色彩的深淺，以“+”、“-”號表明。也可測O·D值：在ELISA檢查儀上，ELISA試劑盒于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)則的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。