4種動(dòng)物藥水提液中3種嘌呤堿HPLC法測(cè)定

對(duì)烏蛇、蟾蜍、土蟲和地龍干燥粉末進(jìn)行超聲提取、離心分離、濾膜過(guò)濾后直接注入液相色譜儀中測(cè)定,紫外檢測(cè)黃嘌呤、次黃嘌呤、腺嘌呤含量。

• 主要儀器和試劑

   等度液相色譜儀，配紫外檢測(cè)器

   超聲波清洗機(jī)            離心機(jī)：10 000 r /min

   無(wú)油真空泵              溶劑過(guò)濾器

   柱溫箱                  甲醇：色譜純

   標(biāo)準(zhǔn)品:次黃嘌呤( hypoxanthine) 、黃嘌呤( xanthine) 、腺嘌呤( adenine)

   實(shí)驗(yàn)室用水為超純水

• 色譜條件

   色譜柱：C18色譜柱，250 mm ×4.6 mm, 5μm

流動(dòng)相：甲醇：水=5:95（V:V）

流速：1.0 mL /min

柱溫：30 ℃

檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm

進(jìn)樣量：20μL

• 標(biāo)準(zhǔn)試樣配置

   將標(biāo)準(zhǔn)品配制成濃度為015 g/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，逐級(jí)稀釋,配制成濃度為510 ×10^{- 9}、110 ×10^{- 8}、210 ×10^{- 8}、510 ×10^{- 8}、110 ×10^{- 7}、210 ×10^{- 7}、510 ×10^{- 7}、810 ×10^{- 7} g/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列,經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后,直接注入色譜儀測(cè)

其峰高,以質(zhì)量濃度c ( g/mL)對(duì)峰高y進(jìn)行線性回歸,得次黃嘌呤、黃嘌呤、腺嘌呤線性方程分別為: y =81935 8x - 11219 7 ( r =01999 7) ; y =31242 6x +01562 5 ( r =01999 9) ; y =31951 6x - 01516 9 ( r =01999 6)。

• 試樣配置

     分別將烏蛇、蟾蜍、土蟲、地龍樣品粉碎、混勻、過(guò)孔徑為180μm篩,準(zhǔn)確稱取樣品置于試劑瓶中,加入純凈水8 mL,蓋緊瓶塞,超聲提取一定時(shí)間,將提取液轉(zhuǎn)入離心管中,以10 000 r /min離心10 min,清液轉(zhuǎn)入10 mL容量瓶中定容、搖勻。經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后直接注入色譜儀測(cè)定。以保留時(shí)間定性,外標(biāo)峰高法定量。