目前酶免疫分析(EIA)技術(shù),已被廣泛應(yīng)用于抗原,半抗原或抗體的定量或定性檢測分析。辣根過氧化物酶(HRP)及其偶聯(lián)物是酶聯(lián)免疫分析技術(shù)中常用的一種酶,由于3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)在HRP的顯色反應(yīng)體系中,比其它色原具有更高的靈敏度且無至癌性而被廣泛應(yīng)用。TMB主要應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA),免疫斑點雜交或者免疫組化以及氯和過氧化氫的檢測分析。為了滿足不同的試劑盒產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)以及科研需求,本公司專門研制了針對不同類型的基于HRP的免疫分析用TMB顯色液。
TMB單組分顯色液特點:
即用型:無需混合,方便快捷,減少誤差
靈敏度高:不低于A.、B液
穩(wěn)定性好:2-8℃保存,有效期不低于36個月;顯色終止后讀數(shù)穩(wěn)定
背景低:底物溶液在650nm檢測時檢測OD值小于0.04
質(zhì)量可靠:產(chǎn)品批間差異小
外觀:本試劑一般情況下為無色,有時略顯淺藍色或淺黃色
TMB單組分顯色液使用方法:
用適當?shù)母蓛羧萜鳎ㄓ眉儍羲磸?fù)沖洗),倒出適量的單組分TMB顯色液,待達到室溫后即可使用。
加液:加完HRP結(jié)合物并孵育一定時間后,用適當洗滌液洗板3-5次,每孔加TMB顯色液100ul。 根據(jù)個人實驗需要,在室溫(15-25℃)或37℃下避光溫育10-30分鐘或更長時間,直至顯色至預(yù)期深淺。
終止:加入等體積的1M 鹽酸或硫酸溶液終止反應(yīng),孔中反應(yīng)液由藍色變?yōu)辄S色。
讀數(shù):終止反應(yīng)后30分鐘內(nèi)在450nm處測定吸光值。
注意:如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀,表明TMB底物反應(yīng)過于強烈。為了避免產(chǎn)生沉淀,可在終止后馬上讀數(shù);或者進一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物。
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