簡(jiǎn)介

CCK8實(shí)驗(yàn)，全稱Cell Counting Kit-8，是一種常用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)的比色法。該實(shí)驗(yàn)基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）的還原反應(yīng)。在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liusuan二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下，WST-8被活細(xì)胞中線粒體中的脫氫酶還原形成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，通過測(cè)定在特定波長(zhǎng)（通常是450nm）處的吸光度（OD值），可以間接計(jì)算活細(xì)胞的數(shù)量。

CCK8實(shí)驗(yàn)步驟

  1.細(xì)胞接種：將細(xì)胞接種到96孔板中，并在適宜條件下培養(yǎng)至適宜密度。

  2.藥物處理：向含有細(xì)胞的孔中加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。

  3.孵育：將培養(yǎng)板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間，以便藥物與細(xì)胞作用。

  4.添加CCK8：向每個(gè)孔中加入CCK8溶液，繼續(xù)孵育一段時(shí)間（通常為1-4小時(shí)）。

  5.檢測(cè)吸光度：使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值。

  6.數(shù)據(jù)分析：根據(jù)吸光度值計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)生存分?jǐn)?shù)或抑制率，并進(jìn)行進(jìn)一步分析。

注意事項(xiàng)

  1.實(shí)驗(yàn)中應(yīng)避免使用含有強(qiáng)還原劑的培養(yǎng)基，以免影響CCK8的檢測(cè)結(jié)果。

  2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以校準(zhǔn)細(xì)胞數(shù)量與吸光度值之間的關(guān)系。

  3.孵育時(shí)間應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況調(diào)整，以確保OD值處于適宜范圍內(nèi)。

  4.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，以保證結(jié)果的重復(fù)性和可比性。